1、犬細(xì)小病毒病是由犬細(xì)小病毒（Canine parvovirus，CPV）引起的一種急性傳染病。此病以主要表現(xiàn)急性出血性胃腸炎和急性心肌炎。此病傳染性強，發(fā)病率和死亡率高，是一種危害犬，特別是幼犬的一種重要傳染性疾病。
　　 人們研究證明宿主細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(Transferrin receptor，TfR)是犬、貓等動物細(xì)小病毒侵入宿主細(xì)胞的受體。在感染過程中，病毒的衣殼蛋白VP2可以與宿主細(xì)胞膜TfR結(jié)合，在該受體介導(dǎo)下

2、通過依賴dynamin和clathrin介導(dǎo)的內(nèi)吞過程使病毒侵入宿主細(xì)胞。
　　 為了在分子水平上研究VP2與TfR的相互作用，需要制備VP2蛋白。為獲得大量具有生物活性的VP2蛋白，我們選用真核表達(dá)系統(tǒng)。采用人的CD5信號肽構(gòu)建了VP2分泌型表達(dá)載體，并利用CHO-K1細(xì)胞建立了VP2蛋白穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。
　　 首先通過酶切從含有人CD5信號肽序列的質(zhì)粒中將CD5信號肽片段切出，分離純化酶切片段，并將其克隆到pcDNA

3、3.1A的多克隆位點上，再轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)過酶切鑒定篩選出陽性克隆，測序正確的重組質(zhì)粒命名為pcDNA3.1-CD5sp。
　　 然后根據(jù) GenBank中CPV的VP2序列（AB120727）設(shè)計1對引物，通過PCR方法從含有VP2基因的質(zhì)粒中擴(kuò)增VP2基因的編碼序列，并將其插入到pcDNA3.1-CD5sp載體中CD5信號肽的下游，使其與CD5信號肽序列融合，構(gòu)建成VP2基因的真核分泌型表達(dá)載體pcDNA-

4、CD5sp-VP2。
　　 為了解構(gòu)建的真核表達(dá)載體能否在真核細(xì)胞進(jìn)行分泌性表達(dá)，首先經(jīng)磷酸鈣介導(dǎo)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，使其在真核細(xì)胞中進(jìn)行分泌表達(dá)。通過測序，結(jié)果表明，構(gòu)建的犬細(xì)小病毒VP2基因的分泌型表達(dá)載體結(jié)構(gòu)正確，在293T細(xì)胞中的表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Western-blot檢測證明人的CD5信號肽序列能夠介導(dǎo)犬細(xì)小病毒VP2基因在真核細(xì)胞進(jìn)行分泌性表達(dá)。
　　 然后經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)，將重組pcDNA-CD5sp-VP2質(zhì)粒載體和