1、犬細(xì)小病毒病是由犬細(xì)小病毒(CPV)引起的犬的一種急性傳染病，以劇烈嘔吐、腹瀉和血液白細(xì)胞顯著減少、出血性腸炎和非化膿性心肌炎為主要特征。多發(fā)生于幼犬，病死率為10～100％，給世界各國(guó)養(yǎng)犬業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 CPV的中和抗原表位主要位于VP2上，VP2基因全長(zhǎng)1755bp，編碼584個(gè)氨基酸，VP2蛋白是CPV的免疫原性蛋白，編碼CPV的主要抗原決定簇，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體。 本研究根據(jù)GeneBank已發(fā)表的

2、CPVVP2基因序列，利用軟件Primer5.0設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物，通過(guò)IPCR擴(kuò)增出1755bp的基因片段，將其克隆到T-easy載體，構(gòu)建了重組表達(dá)質(zhì)粒pPICZαA-VP2，對(duì)其中的VP2進(jìn)行序列測(cè)定，并將測(cè)序結(jié)果同CPV的其他幾個(gè)基因變異型：CPV-d(CPV-2)、CPV-15(CPV-2a)、CPV-39(CPV-2b)、CPV-31(CPV-2c)的VP2基因進(jìn)行序列比較，核苷酸同源性分別為98.95％，98.85％，98

3、.75％，推導(dǎo)的氨基酸同源性分別為98.97％，98.75％，98.75％，經(jīng)PCR及雙酶切鑒定，目的基因正確插入pPICZαA轉(zhuǎn)座載體中，利用載體特異性引物5’AOX1/3’AOX1進(jìn)行PCR鑒定，結(jié)果證實(shí)成功構(gòu)建重組pPICZαA-VP2。SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示，表達(dá)VP2蛋白分子量約為64.35KD，Western-bloting結(jié)果證實(shí)表達(dá)蛋白能夠被CPV陽(yáng)性血清識(shí)別。ELISA結(jié)果證實(shí)本試驗(yàn)獲得的VP2重組蛋白與CPV陽(yáng)