1、犬細(xì)小病毒(Canineparvovirus)屬于自主復(fù)制性細(xì)小病毒科，細(xì)小病毒屬，貓細(xì)小病毒亞群(parvovirinae)。犬細(xì)小病毒(CPV)對(duì)于犬及犬科動(dòng)物來(lái)說(shuō)都是一個(gè)重要的病原，它能引起急性腸炎，白細(xì)胞減少，嘔吐，以及幼犬的心肌炎等病癥。早在1967年，Binn等從犬分離到第一種犬細(xì)小病毒—犬微小病毒(minutevirusofcanine.MVC)，后命名為CPV-1。而后美國(guó)學(xué)者Eugster和Nairn從患出血性腸炎的病

2、犬糞便中首先觀察到CPV，并于1978年由澳大利亞的Kelly和加拿大的Thomson等首次從患腸炎的病犬中分離到，為了與CPV-1區(qū)別，這次分離到的CPV被命名CPV-2，隨后在全世界十多個(gè)國(guó)家被證實(shí)。CPV-2在致病性和抗原性上與CPV-1顯著不同。該病毒自1978年首先發(fā)現(xiàn)后，十分迅速的在世界范隔內(nèi)傳播(1978-1981)，隨后CPV-2型犬細(xì)小病毒被新的抗原變異株取代，即：犬細(xì)小病毒2a亞型(CPV-2a)，犬細(xì)小病毒2b亞型

3、(CPV-2b)，犬細(xì)小病毒2c亞型(CPV-2c)。 本研究旨在探究犬細(xì)小病毒的流行和變異情況，通過對(duì)南京某寵物醫(yī)院疑似犬細(xì)小病毒病例進(jìn)行病毒分離，分離出一株犬細(xì)小病毒，經(jīng)形態(tài)學(xué)、理化學(xué)、生物學(xué)和分子病毒學(xué)等鑒定：病毒能在CRFK細(xì)胞上生長(zhǎng)，并產(chǎn)生細(xì)胞腫脹、變圓、破碎、脫落等細(xì)胞病變；病毒粒子呈立體對(duì)稱，直徑為20—24nm，無(wú)囊膜，抗氯仿，耐酸，耐熱；能凝集豬紅細(xì)胞，不能凝集人、雞、豚鼠、兔的紅細(xì)胞，并能被已知的犬細(xì)小病毒陽(yáng)

4、性血清所抑制。用犬細(xì)小病毒(CPV)特異性引物對(duì)病毒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，能夠擴(kuò)增出CPV特異性片段。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，試驗(yàn)組犬均出現(xiàn)細(xì)小病毒癥狀。 對(duì)所分離的犬細(xì)小病毒核苷酸進(jìn)行核苷酸序列分析，根據(jù)GenBank公布的CPV基因序列，設(shè)計(jì)兩對(duì)引物對(duì)CPV/nj01/06的5’端和3’端進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)測(cè)序拼接后，得到長(zhǎng)約4600bp并涵蓋所有閱讀框架的基因組。對(duì)由核苷酸序列推導(dǎo)的非結(jié)構(gòu)蛋白NS1分析發(fā)現(xiàn)：NS1蛋白顯示出略帶酸性的特征，整段

5、蛋白以α螺旋為主，且無(wú)規(guī)律性的出現(xiàn)折疊和轉(zhuǎn)角。蛋白N端與C端顯示出較強(qiáng)的親水性特性。同樣對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白VP2分析發(fā)現(xiàn)，VP2蛋白主要存在2段明顯的強(qiáng)親水性區(qū)域，一個(gè)位于內(nèi)部(340-420位氨基酸)，分析是潛在跨膜區(qū)；另一個(gè)位于N端(5-30位氨基酸)，為潛在信號(hào)肽序列。通過參考其他CPVVP2基因序列構(gòu)建CPVVP2序列核苷酸系統(tǒng)發(fā)生樹，通過該發(fā)生樹發(fā)現(xiàn)，CPV/nj01/06株與其他細(xì)小病毒序列同源，并與中國(guó)、越南、中國(guó)臺(tái)灣、日本的犬細(xì)

6、小病毒分離株VP2基因序列距離較近，而與美國(guó)，新西蘭分離株的距離較遠(yuǎn)。此外，通過對(duì)犬細(xì)小病毒CPV/nj01/06株VP2蛋白關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)：CPV/nj01/06株屬于犬細(xì)小病毒2a亞型(CPV-2a)。 設(shè)計(jì)合成特異性引物，以CPV/nj01/06株為模板經(jīng)PCR擴(kuò)增VP2基因片斷，將其克隆到pGEX-6p-1載體中，并轉(zhuǎn)入表達(dá)宿主菌BL21(DE3)中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后表達(dá)得到目的蛋白，分子量大小與期望值相同，