1、高血壓，是一種全球人類最常見的慢性病;也是引起腦血管病、心臟病、腎臟病的發(fā)生和死亡的最主要因素。治療和預(yù)防高血壓病是建設(shè)健康中國的重要課題。目前，在血壓調(diào)節(jié)系統(tǒng)中，單獨的腎素抑制劑和ACE抑制劑是治療高血壓常用的有效藥物。但是，單獨使用腎素抑制劑和ACE抑制劑在臨床實驗中存在不良反應(yīng)。聯(lián)合使用ACE抑制劑和腎素抑制劑在降低血壓的同時，還可以減少對其它器官的損傷。食源性的降血壓肽與合成的降血壓抑制劑相比，溫和、安全，能減少對靶器官的傷害，

2、還兼具其它功能特性，且易于吸收。因此，越來越多的研究者傾向于從食物中獲取降血壓多肽。
　　本文的研究工作主要是桃仁分離蛋白降血壓肽的制備及其分離純化。首先以桃仁分離蛋白為原料，通過不同的蛋白酶水解，以水解度(degree ofhydrolysis，DH)、ACE抑制率和腎素抑制率為評價指標(biāo)，分別研究了其酶解工藝，優(yōu)化了酶解工藝參數(shù);其次桃仁分離蛋白酶解物為研究對象，通過超濾、大孔吸附樹脂、凝膠過濾色譜、高效液相色譜等手段分離、純化

3、酶解產(chǎn)物，為桃仁分離蛋白資源的深入開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。得到了以下結(jié)果:
　　1)桃仁分離蛋白水解酶的選擇實驗。用復(fù)合蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶、堿性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶以及聯(lián)合使用胃和胰蛋白酶，對桃仁分離蛋白進行酶解，以DH、ACE抑制率和腎素抑制率作為評價指標(biāo)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，堿性蛋白酶制備的酶解物具有較高的ACE抑制率和腎素抑制率。因此，選擇堿性蛋白酶作為實驗用酶。
　　2)桃仁分離蛋白酶解工藝參數(shù)的優(yōu)

4、化實驗。以桃仁分離蛋白為底物，采用堿性蛋白酶水解桃仁分離蛋白制備腎素和ACE雙重抑制肽。以體外ACE抑制率和腎素抑制率為評價指標(biāo)，通過單因素實驗對酶解溫度、酶解pH值、底物質(zhì)量濃度和加酶量等酶解工藝參數(shù)進行研究，并用響應(yīng)面法優(yōu)化酶解工藝參數(shù)。結(jié)果表明，堿性蛋白酶水解桃仁分離蛋白制備腎素和ACE雙重抑制肽的最佳工藝為酶解溫度50.6℃，酶解pH值8.02，加酶量3.06％。得到的酶解產(chǎn)物ACE抑制率為69.03％，腎素抑制率為57.61％

5、。
　　3)利用超濾膜和大孔吸附樹脂對桃仁分離蛋白降血壓肽進行分離純化。分別選用截留分子量(MWCO)50KDa、10KDa、5KDa、1KDa的膜對桃仁分離蛋白酶解物進行超濾分離，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，超濾后各組分ACE抑制率和腎素抑制率存在較大差異，其中，MWCO為1KDa透過液組分ACE抑制率和腎素抑制率均最高。采用大孔吸附樹脂對超濾后的活性組分進行脫鹽處理，考察了LSA-21、D101、XDA-6、DA201-C、LX-1180、AB

6、-8六種大孔吸附樹脂對桃仁分離蛋白降血壓肽的吸附洗脫效果，發(fā)現(xiàn)DA201-C對桃仁分離蛋白降血壓肽的分離效果為最佳，其吸附率達到68.84％，解析率達到80.75％。因此，選擇大孔樹脂DA201-C進行后續(xù)實驗。綜合考察樣品的上樣濃度、pH、鹽濃度、上樣流速、乙醇洗脫劑濃度、洗脫劑流速和洗脫劑體積等因素對桃仁分離蛋白降血壓肽的純化效果的影響，最后得出其最佳分離工藝:上樣濃度20mg/mL、pH7.0、上樣流速0.5mL/min、乙醇濃度

7、70％、洗脫流速1.0mL/min。在此條件下，70％乙醇洗脫液組分具有最高的ACE抑制活性和腎素抑制活性。
　　4)Sephadex G-15凝膠色譜和半制備RP-HPLC對桃仁分離蛋白降血壓肽分離、純化和精制。經(jīng)過大孔樹脂脫鹽純化后的解析液再通過SephadexG-15純化，在樣品濃度150mg/mL、洗脫流速0.8mL/min、上樣體積1mL的條件下，得到3個組分，其中組分G2的ACE抑制活性和腎素抑制活性相對最高。將組分G