1、目的：腦損傷（traumatic brain injury，TBI）是因外傷引起的腦部損傷，從而引起部分神經(jīng)元的丟失或死亡，導(dǎo)致相關(guān)神經(jīng)功能喪失甚至死亡的重要原因。隨著目前醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，在治療腦損傷過(guò)程取得一定進(jìn)展，但目前傷者相關(guān)神經(jīng)功能的治療及恢復(fù)仍是一個(gè)世界性難題。之前的研究結(jié)果表明，腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子（brain-derived neurotrophic factor，BDNF）過(guò)表達(dá)的神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cells

2、,NSCs)在移植大鼠后，促進(jìn)了損傷周?chē)窠?jīng)細(xì)胞的存活，促進(jìn)損傷大鼠的運(yùn)動(dòng)機(jī)能的恢復(fù)。本研究進(jìn)一步探討B(tài)DNF過(guò)表達(dá)的神經(jīng)干細(xì)胞(BDNF/NSCs)促進(jìn)損傷區(qū)域及周?chē)窠?jīng)細(xì)胞存活的相關(guān)機(jī)制，以及BDNF/NSCs移植后促進(jìn)大鼠的運(yùn)動(dòng)機(jī)能恢復(fù)的機(jī)制研究，從而為以后臨床進(jìn)一步治療TBI及神經(jīng)功能的恢復(fù)提供理論依據(jù)。
　　方法：將已獲得穩(wěn)定的BDNF/NSCs和NSCs傳代培養(yǎng)，并移植于采用改良的Feeney法制備的TBI模型。于造模

3、后72小時(shí)，隨機(jī)分配兩組：NSCs組和BDNF/NSCs組，BDNF/NSCs和NSCs均別取2×107cells/mL對(duì)應(yīng)的移植于NSCs組和BDNF/NSCs組的大鼠內(nèi)皮層中，分別在移植后第1周，第2周，第3周，第4周取移植及周?chē)鷧^(qū)域組織進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。另外，還對(duì)移植神經(jīng)干細(xì)胞移植前進(jìn)行PHK26熒光示蹤標(biāo)記，以便檢測(cè)移植神經(jīng)干細(xì)胞的存活數(shù)量，并觀(guān)察移植細(xì)胞在損傷區(qū)域的遷徙。本文將對(duì)研究對(duì)象分兩部分進(jìn)行相關(guān)蛋白的檢測(cè)。第一部分中，

4、對(duì)骨架相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)，并采用免疫組化對(duì)NF200的檢測(cè)，采用免疫熒光技術(shù)對(duì)MAP2進(jìn)行檢測(cè)和采用Western blotting技術(shù)actin及CaM及β-catenin骨架相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)。在第二部分在，采用同樣采用免疫組化、免疫熒光、Western blotting等技術(shù)對(duì)抗氧化反應(yīng)通路的相關(guān)蛋白進(jìn)行檢測(cè)，另外，采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)酪氨酸激酶（TrkB）和硫氧還蛋白(Trx)的基因表達(dá)。
　　結(jié)果：對(duì)兩部分分別進(jìn)行相關(guān)實(shí)

5、驗(yàn)研究，從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以明確觀(guān)察到，與移植NSCs組相比，在移植后的各個(gè)時(shí)間段，移植BDNF/NSCs組中相關(guān)蛋白均有明顯的增加。第一部分實(shí)驗(yàn)中，移植BDNF/NSCs組中骨架相關(guān)蛋白(NF200，MAP2，actin，CaM)明顯增多;在第二部分實(shí)驗(yàn)中，抗氧化反應(yīng)通路相關(guān)蛋白p-TrkB，TrkB，Ras，p-Erk1/2，Nrf2，Trx等蛋白在不同的時(shí)間點(diǎn)均有明顯升高，突觸后蛋白(PSD-95)表達(dá)明顯增多。
　　結(jié)論：本實(shí)

6、驗(yàn)成功構(gòu)建腦損傷(TBI)模型，分別移植BDNF/NSCs和NSCs到對(duì)應(yīng)的BDNF/NSCs和NSCs組。從第一部分實(shí)驗(yàn)中結(jié)果表明，BDNF修飾的干細(xì)胞在移植后，促進(jìn)損傷周?chē)耙浦哺杉?xì)胞的存活、生長(zhǎng)、分化與骨架相關(guān)蛋白表達(dá)有關(guān)。且進(jìn)一步研究了BDNF促進(jìn)相關(guān)骨架蛋白的表達(dá)可能Wnt/β-catenin信號(hào)通路有關(guān)。另外，在第二部分實(shí)驗(yàn)中，進(jìn)一步研究了損傷后BDNF促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的機(jī)制，其結(jié)果表明，BDNF通過(guò)BDNF/TrkB通路作