1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文神經(jīng)干細(xì)胞移植治療視神經(jīng)損傷的實(shí)驗(yàn)研究姓名：柳浩然申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：方加勝20060501博：I：學(xué)位論文中文摘要以期為基礎(chǔ)及臨床應(yīng)用研究提供詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。研究包括以下四個(gè)部分。第一部分神經(jīng)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定目的分離神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)，體外培養(yǎng)傳代，誘導(dǎo)其分化并進(jìn)行鑒定，為應(yīng)用研究奠定基礎(chǔ)。方法從胚胎大鼠的大腦皮層、室管膜下區(qū)和海馬等部位分離NSCs，用無血清培養(yǎng)技術(shù)體外培養(yǎng)、擴(kuò)增、

2、傳代，去除生長(zhǎng)因子后誘導(dǎo)NSCs分化，采用免疫熒光技術(shù)對(duì)NSCs及分化的神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。同時(shí)在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)，建立簡(jiǎn)單方便的NSCs傳代培養(yǎng)技術(shù)。結(jié)果從胚胎大鼠的大腦皮層、室管膜下區(qū)和海馬組織可獲得大量的NSCs，這些細(xì)胞在培養(yǎng)基中自我增殖并分化表達(dá)神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的特異性抗原NeuN、GFAP和MBP。反復(fù)傳代后這些細(xì)胞仍可保持自我增殖及多向分化的潛能。結(jié)論胚鼠的NSCs具有自我更新和增殖能力，并具備多向分化潛能，可

3、分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞。體外長(zhǎng)期傳代培養(yǎng)可保持NSCs的基本特性。第二部分神經(jīng)干細(xì)胞在視網(wǎng)膜內(nèi)的存活、整合和分化目的觀察神經(jīng)干細(xì)胞(NSCs)移植后在視神經(jīng)損傷大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)的存活、整合和分化情況。方法48只健康成年SD大鼠隨機(jī)分為A組(視神經(jīng)損傷組)和B組(對(duì)照組)，每組24只，A組使用精確校準(zhǔn)方法在大鼠右眼造成部分視神經(jīng)損傷，隨后手術(shù)顯微鏡下，利用體內(nèi)移植技術(shù)，將培養(yǎng)好的NSCs注入右眼玻璃體下腔內(nèi)；B組正常大鼠，正