1、該研究包括三部分內(nèi)容：1.PKD1全基因編碼區(qū)的特異性擴(kuò)增：利用PKD1與同源序列間細(xì)微的堿基差異，設(shè)計(jì)了82對(duì)涵蓋PKD1編碼區(qū)14.15kb的擴(kuò)增引物，在對(duì)富集G、C堿基和重復(fù)序列的多拷貝區(qū)擴(kuò)增時(shí)，首先利用長(zhǎng)鏈PCR方法獲得平均長(zhǎng)度約3.7kb左右的8條擴(kuò)增片段，成功排除了同源序列的干擾.接著通過(guò)57對(duì)巢式PCR引物，進(jìn)一步將長(zhǎng)鏈擴(kuò)增產(chǎn)物分割成平均長(zhǎng)度約285np左右的短片段，以便于下一步利用單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析技術(shù)來(lái)檢測(cè)突變.2.單

2、鏈構(gòu)象多態(tài)性（single-strand confirmation polymorphism,SSCP）檢測(cè)PKD1突變體系的建立：以85名正常人PKD1擴(kuò)增產(chǎn)物為材料，通過(guò)調(diào)試SSCP電泳時(shí)所采用的非變性聚丙烯酰胺膠的不同厚度、不同凝膠配制方案及電場(chǎng)電壓、電泳溫度等參數(shù)，尤其是改進(jìn)了傳統(tǒng)上樣緩沖液的配方，用蔗糖替代甲酰胺，顯著增加了SSCP中單鏈濃度，提高了檢測(cè)靈敏度.摸索出較為適合PKD1檢測(cè)的工作條件，建立了篩檢漢族人PKD1突變

3、的PCR-SSCP檢測(cè)體系.該技術(shù)體系已申報(bào)國(guó)家發(fā)明專(zhuān)利（申請(qǐng)?zhí)?3115435.2）.3.ADPKD漢族人患者PKD1突變檢測(cè)：利用建立的漢PKD1突變的PCR-SSCP檢測(cè)體系，對(duì)19個(gè)ADPKD漢族人家系的67位成員PKD1進(jìn)行了突變檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)了9個(gè)正?；蚨鄳B(tài)性位點(diǎn)、11個(gè)致病突變，后者包括了7個(gè)錯(cuò)義突變、2個(gè)無(wú)義突變、1個(gè)插入突變及1個(gè)缺失突變，其中有7個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)和10個(gè)致病突變位點(diǎn)為首次報(bào)道.對(duì)突變結(jié)果的整理分析后

4、發(fā)現(xiàn)：（1）除了上述新發(fā)現(xiàn)的基因多態(tài)性位點(diǎn)及致病突變位點(diǎn)外，已報(bào)道的多態(tài)性位點(diǎn)和致病突變位點(diǎn)的發(fā)生率與國(guó)外資料相比有明顯不同，推測(cè)可能與不同人種間基因組堿基差異有關(guān);（2）正常基因多態(tài)性和致病突變以堿基轉(zhuǎn)換為主，即G與A之間或C與T之間的轉(zhuǎn)換分別占50％和35％;（3）突變發(fā)生部位多集中在堿基重復(fù)序列區(qū)附近;（4）與正常基因多態(tài)性不同，致病突變常常導(dǎo)致其編碼氨基酸親水性和所帶電荷的明顯改變，從而推測(cè)氨基酸構(gòu)成多態(tài)鏈的正確構(gòu)象對(duì)維持多囊蛋

5、白的正常生理功能具有重要作用;（5）雖然PKD1基因型與ADPKD患者的某種臨床表現(xiàn)型間有特定的聯(lián)系，但該研究發(fā)現(xiàn)某種突變的基因型與患者的起病癥狀間有密切關(guān)系，即同一ADPKD家系中，患者起病癥狀十分相近.該研究建立了以PCR-SSCP分析方法檢測(cè)PKD1全基因編碼區(qū)突變的篩查體系.首次報(bào)道了漢族人PKD1全編碼區(qū)內(nèi)的7個(gè)基因多態(tài)性位點(diǎn)和10個(gè)致病突變.這為探討ADPKD基因型與表現(xiàn)型關(guān)系，闡明其發(fā)病機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，為實(shí)現(xiàn)多囊腎病的產(chǎn)前