1、阿莫西林是一種廣譜性青霉素類半合成抗生素，在我國及世界范圍內有著廣泛的應用。應用具有特異性、反應條件溫和，產(chǎn)物中雜質含量少，對環(huán)境污染小的酶法合成阿莫西林工藝是工業(yè)生產(chǎn)阿莫西林最好的選擇。青霉素G酰化酶(PGA)是催化合成阿莫西林反應所用的關鍵酶，但在阿莫西林的合成過程中還伴隨阿莫西林的水解反應。經(jīng)調研可知來源于Achromobacter sp CCM4824菌上的青霉素?；妇哂休^高的合成活性。
　　 本文通過DNAworks

2、在線分析軟件對Achromobacter sp CCM4824上的青霉素酰化酶基因進行優(yōu)化使其適合在大腸桿菌中表達，并對優(yōu)化后的基因直接進行人工合成。
　　 利用基因工程手段，將合成的PGA基因分別克隆到pET01-T和pET28a表達載體中，構建了誘導型重組質粒pET01-PGA、pET28a-PGA，并將其分別轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中進行表達。重組菌BL21(DE3)/pET01-PGA和BL21(DE3)/pET

3、28a-PGA表達的PGA酶活分別為30U·L-1、105 U·L-1，單位菌體濃度下，后者表達的PGA酶活比前者高147％。SDS-PAGE顯示二者均有無活性的PGA前體包涵體產(chǎn)生。
　　 為了減少無活性包涵體的形成，構建了具有相對較弱啟動PGA表達的pUCK-lac-PGA、pUCK-HP-PGA組成型表達質粒，通過對不同宿主菌的選擇，最終確定表達效果最好的宿主菌為E.coli BL21。重組菌BL21/pUCK-lac-P