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文檔簡介
1、目的:探討葉酸.青霉素G?;概悸?lián)物(F-PGA)是否對葉酸受體陽性細胞及實體腫瘤具有靶向作用,以及對該酶在體內(nèi)的藥代動力學進行研究,為進一步的葉酸靶向酶聯(lián)合前藥治療(FDEPT)奠定基礎。 方法:(1)用Iodogen法對F-PGA和PGA進行1251標記,經(jīng)高壓液相(HPLC)和紙層析法鑒定放化純度,用三氯醋酸(TCA)沉淀法行體外穩(wěn)定性監(jiān)測,并用對二甲氨基苯甲醛(PDAB)法測定酶活力。(2)用共聚焦顯微鏡觀察葉酸受體陽性
2、的宮頸癌HeLa細胞株和卵巢癌SKOV3細胞株以及葉酸受體陰性的肺癌A549細胞株攝取F-PGA或葉酸(F-A)隨時間變化的情況;并用放射配體結合分析法,檢測在37~C或4C下HeLa、SKOV3和A549細胞結合并內(nèi)化125I_F.PGA或125I_PGA隨時間及濃度的變化情況,并用Scatchard方法分析F-PGA與受體的親和力(用解離常數(shù)Kd表示)及最大結合位點數(shù)(Bmax)。(3)給荷HeLa腫瘤的裸鼠分別注射125I_F_P
3、GA、125I_PGA、125I.F.PGA+lOmgF-A和1251(給荷SKOV3腫瘤的裸鼠則分別注射125I_F.PGA和125I.PGA)后不同時間點,行SPECT顯像,并于24h顯像結束后解剖,對各臟器進行稱重及測量放射性計數(shù)。計算腫瘤/健側肌肉(T/M)和腫瘤/非腫瘤組織(T/NT)的放射性計數(shù)比值等。(4)用同位素示蹤法研究125I.F.PGA和125I-PGA的藥代動力學性質(zhì)及其在正常小鼠體內(nèi)的分布,計算藥代參數(shù)(采用D
4、ASl.O軟件包)和各臟器的每克組織的百分注入劑量(%ID/g)。 結果:(1)125I.F.PGA和12SI_PGA的標記率達90%,放化純度大于95%,體外穩(wěn)定性較好,且葉酸偶聯(lián)和1251標記對酶的活性損傷都較小。(2)F-PGA或F-A可被HeLa和SKOV3細胞攝取,而不能被A549細胞攝取,且這種選擇性的攝取隨時間的增加而增加直至達到飽和。125I_F.PGA亦能被HeLa或SKOV3細胞結合并內(nèi)化,且呈時間、溫度和濃
5、度的依賴性及飽和性,還能被葉酸所競爭抑制,而12SI.PGA不能與HeLa細胞特異性結合,125I.F.PGA也不與A549細胞結合。在4℃下,125I-F-PGA與HeLa和SKOV3細胞膜上葉酸受體的Kd分別為O.1lnmol/L和0.25nmol/L,Bmax分別為0.48x104個/細胞和1.03×104個/細胞,而在37'C下,受體參與內(nèi)化和循環(huán)過程,使膜上有效受體結合位點數(shù)增加一倍。(3)注射125I-F-PGA組的SPEC
6、T顯像,可見腫瘤部位有明顯的放射性濃聚影,其T/M值.時間曲線明顯高于其余各組的T/M值.時間曲線,用統(tǒng)計學分析亦有顯著差異(P
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