1、明串珠菌是一類進(jìn)行異型發(fā)酵的革蘭氏陽性、耐氧的乳酸細(xì)菌,被美國FDA認(rèn)定為一般安全的菌。明串珠菌能夠代謝產(chǎn)生葡聚糖、甘露醇、雙乙酰等物質(zhì),在功能性食品、乳制品等領(lǐng)域有廣泛應(yīng)用。本課題特異性失活明串珠菌ALDH基因,得到突變菌株,然后和原始菌株生理生化特性進(jìn)行對照,為基因工程育種奠定了基礎(chǔ)。
　　電擊轉(zhuǎn)化效率直接影響同源重組的幾率,本文從多個因素優(yōu)化了明串珠菌電擊轉(zhuǎn)化的條件。結(jié)果表明,用氨芐濃度0.7μg/mL的MRS培養(yǎng)基培養(yǎng)明串

2、珠菌細(xì)胞至OD600為0.5左右,以PBS作緩沖液,收獲制成感受態(tài)細(xì)胞,與10μLDNA混合,在電場強(qiáng)度12KV/cm、電阻200Ω、電容25μF下電擊轉(zhuǎn)化,以含80mmol/LMgCl2的MRS培養(yǎng)基復(fù)蘇培養(yǎng)3h,得到最高的轉(zhuǎn)化效率為1.75×105CFU/μgDNA。
　　同源重組載體的構(gòu)建在基因失活技術(shù)中占重要地位。本文以紅霉素抗性作為篩選標(biāo)記,連接到載體pTA2上,構(gòu)建了中間載體pTA2-ErmAM。再將ALDH基因的左右