1、S t u d y o n t h e E f f e c t so f F e r u l i c A c i dS u g a r E s t e r ：f r q C—H ，O E s t e r sf r o m o r n B r a n o n H ，． a r C ， ，．i n d u c e d C e l lS e n e s c e n c e o nm I M C D 3T h e s i ss u b m i

2、t t e d t oQ i n g d a o A g r i c u l m r a l U n i v e r s i t yI n F u l f i l l m e n t o f t h e R e q u i r e m e n tf o r t h eD e g r e e o fM a s t e r o f E n g i n e e r i n gZ h a n g J i n l i n g( D e p a r

3、 t m e n t o f F o o d S c i e n c ea n d T e c h n o l o g y )S u p e r v i s o r ：G e n g X i nQ i n g d a o ．C h i n aJ u n e ，2 0 1 4青島農業(yè)大學碩士學位論文 摘要玉米麩皮阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導的m I M C D 3細胞衰老的影響摘要玉米麩皮是阿魏酸含量最高的植物細胞壁材料，其中的阿魏酸

4、以酯鍵方式與低聚糖結合構成阿魏酸糖醅。阿魏酸糖酯已被證實具有多種生理活性，我們前期動物試驗結果表明玉米麩皮阿魏酸糖酯具有抗衰老作用，但涉及的機制尚未有報道。本研究的主要目的是通過體外細胞實驗研究玉米麩皮阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導的I T l I M C D 3 細胞衰老的影響及其對衰老相關K l o t h o 基因及蛋白表達水平的影響，探討阿魏酸糖酯抗衰老機制。苯次實驗首先建m I M C D 3 胞的衰老模型，以5 0 “m

5、o l ／L 的H 2 0 2 刺激細胞，設立不同作用時間點，通過檢測細胞衰老、凋亡、氧化指標建立起衰老模型；然后通過M T T法測定阿魏酸糖酯毒性，確定其作用于細胞的劑量：最后在前兩步實驗基礎上加入阿魏酸糖酯溶液研究不同分子量不同劑量的阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導的m I M C D 3 細胞衰老及固D t h o 基因、蛋白袁達水平的影響。本實驗結果如下：1 ．H 2 0 2 誘導的m l M C D 3 細胞衰老模型的建立5

6、0 p m o l ／L 的H 2 0 2 刺激螄M C D 3 細胞7 d 后，細胞內衰老相關半乳糖苷酶染色陽性率達到了9 0 ％以上，細胞周期被不可逆地阻滯在G 1 期細胞比例增加，H o e c h s t 一3 3 3 4 2 染色法觀察細胞內染色均勻無濃密致染的熒光，流式細胞儀檢測無凋亡峰出現(xiàn)，- 蘭田J j 包S O D 活力降低，M D A 含量升高。以上結果說明，5 0 “m o U LH 2 0 2 誘導m l M C

7、 D 3 細) 1 9 7 d ，細胞進入衰老狀態(tài)，且未發(fā)生凋亡現(xiàn)象，對細胞造成了一定程度的氧化損傷，衰老模型成功建立。2 ．玉米麩皮阿魏酸糖酯對H 2 0 2 誘導的m I M C D 3 細胞衰老7 L K l o t h o 基因、蛋白袁達水平的影響首先通過M T T 法確定阿魏酸糖酯的加樣量，分別采g z 5 0 p g ／r n L 、1 0 0 “g ／m L 、2 0 0 p g ／m L作為為低劑量、中劑量和高劑量濃度。

8、通過對培養(yǎng)完畢的細胞檢測發(fā)現(xiàn)，阿魏酸糖酯實驗組可抑* , I l l 2 0 2 對細胞造成的氧化損傷及衰老影響，主要表現(xiàn)有：細胞內半乳糖苷酶活性降低，G 】期比例細胞降低，S 期細胞比例升高，細胞S O D 活力升高，M D A 含量降低。通過R T - P C R 和W e s t e r nB l o t 檢測發(fā)現(xiàn)，大部分阿魏酸糖酯組可顯著提高K l o t h o 基因及蛋白表達水平，說明阿魏酸糖酯可能通過直接上調K l o t