1、植物甾醇存在于植物細胞中，具有十分重要的生理價值，被廣泛應用在醫(yī)學、食品、化工、植物基因工程等領域。自從發(fā)現(xiàn)植物甾醇至今，其定量分析一直處于完善改進之中，各種分析手段有利有弊，目前尚無測定植物油中植物甾醇含量的國標檢測方法。
　　 本研究借鑒現(xiàn)有的檢測食品和食用油中甾醇含量的紫外比色分析方法，以酯交換技術獲得的富含甾醇的大豆油為研究體系，分別采用紫外比色法、氣相色譜法對甾醇進行了定量及定性分析，旨在建立一種快捷、簡單、準確且低成

2、本的甾醇測定方法，為添加植物甾醇的功能性植物油中甾醇的測定提供快速和簡單的分析方法。初步建立測定酯交換大豆油中植物甾醇含量的紫外比色法，并探討了測定條件對顯色反應的影響，確定了最佳測定參數(shù)和條件。通過測定結果的對比分析，紫外比色法測定植物甾醇總含量接近氣相色譜法測定值，可方便、快捷、準確地測定酯交換大豆油中植物甾醇的含量，為植物甾醇酯交換反應過程研究提供分析的理論依據(jù)和技術參數(shù)，填補了我國添加植物甾醇的功能性植物油的日常生產監(jiān)控方法的空

3、白。
　　 本研究的主要內容：
　　 (1)氣相色譜法的建立
　　 應用氣相色譜法對酯交換大豆油中甾醇進行了分析測定，試驗采用HP-5毛細管柱(30m×0.32mm×0.25μ m)為色譜分析柱，實驗結果表明，采用該法可對酯交換大豆油中甾醇進行定量及定性分析，克服了氣相色譜法測定植物甾醇樣品時需要衍生化預處理的缺點，該法測定植物甾醇的響應時間小于16min，且各種甾醇的分離效果較好。
　　 (2)紫外比色

4、法的建立及評價
　　 紫外比色法測定條件的確定：利用甾醇與鐵礬試劑發(fā)生顯色反應，產生紫外吸收的原理，測定酯交換大豆油中甾醇的紫外光譜，經前處理后的植物甾醇通過紫外光譜掃描確定最大吸收波長為564nm，測定植物甾醇的標準曲線。探討了顯色劑用量、顯色劑組成比例、顯色時間和顯色溫度對紫外吸收光譜的影響，確定了最優(yōu)測定參數(shù)為：顯色劑用量2mL，顯色劑組成比例2:8，顯色時間30 min，顯色溫度20℃，確定紫外比色法的測定條件。酯交換大

5、豆油的前處理：通過單因素和正交試驗，對皂化法提取植物甾醇的條件進行了優(yōu)化。得到了最優(yōu)提取參數(shù)為：皂化時間30 min，皂化溫度80℃，堿濃度1.5 mol/L，料液比0.05g/mL。
　　 紫外比色法測定結果略高于氣相色譜法，紫外比色法測定絕對值平均高0.14％，絕對誤差最大為0.21%，平均偏高0.14%，相對誤差最大為3.7%，平均偏高2.95%。差別幅度與甾醇含量不存在關聯(lián)，紫外比色法測定植物甾醇總含量接近氣相色譜法測定

6、值。紫外比色法的測定結果的精密度較高，平均回收率為98.61%，相對標準偏差為0.57%，測定結果準確可靠。
　　 (3)高含量甾醇的酯交換大豆油的制備
　　 采用紫外比色法監(jiān)測酯交換大豆油中甾醇的含量，通過響應面試驗設計確定了最優(yōu)加工工藝，甾醇添加量5%，反應溫度70℃，酶用量1.02%，反應時間3h，在此條件下，酯化率的預測值為88.16%，而實際測得的酯化率為87.81%，實際值與預測值之間的相對誤差為0.35%，