1、目的：
　　探究基因編輯工具剪切效率和脫靶效應評估新方法，開發(fā)新的基因編輯工具剪切效率和脫靶效應評估新體系。
　　方法：
　　選取質粒中博來霉素抗性基因作為實驗候選報告基因。在原核系統(tǒng)構建Amp-Zeocin雙抗質粒。同時在Zeocin抗性基因起始密碼子ATG與第二密碼子GCC間加入BaeI酶切位點，可實現(xiàn)金門克隆插入核酸片段方法。在真核體系構建G418/Kana-Zeocin雙抗質粒，同時也在Zeocin抗性基因起始

2、密碼子ATG與第二密碼子GCC間加入BaeI酶切位點，可實現(xiàn)金門克隆插入核酸片段方法。在候選報告基因中加入不同長度（包括3的整數(shù)倍和非3的整數(shù)倍）、不同種類（含有終止密碼子和不含有終止密碼子，指定序列和任意序列）的核酸片段，觀察其抗性的保留與否；將人工構建的失活抗性基因使用基因編輯工具造成雙鏈斷裂，加入同源oligo，促使其在E.coil中發(fā)生同源重組重新恢復活性，驗證其抗性功能的轉換能力。
　　結果：
　　成功構建雙抗質粒