1、研究背景： 近年來，惡性腫瘤對人類的威脅日趨嚴重。傳統(tǒng)的腫瘤治療方法存在其局限性。人們正積極研究新的腫瘤治療方法，以期獲得更好的療效。隨著分子生物學研究的飛速發(fā)展，細胞生長、分化、凋亡的機制逐漸被認識，一種新的治療方法-基因治療正在成為研究熱點。其中，凋亡素基因能夠特異地誘導腫瘤細胞凋亡，在腫瘤治療上的前景尤為突出。凋亡素能選擇性地誘導腫瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞發(fā)生凋亡，而并不殺傷人和鼠的正常二倍體細胞。因此，被認為是第一個真正意義上的

2、選擇性誘導腫瘤細胞凋亡、而不損傷正常細胞的凋亡基因。經(jīng)過研究凋亡素能夠誘導人成骨肉瘤細胞、肝癌細胞、乳腺癌細胞、肺癌細胞、鱗狀細胞癌細胞、宮頸癌細胞等多種腫瘤細胞凋亡。凋亡素基因表達載體的構(gòu)建是凋亡素分子生物學特點研究及其在腫瘤基因治療方面應用的基礎，如何成功構(gòu)建具有較高轉(zhuǎn)染率和更利于結(jié)果觀察的凋亡素基因表達載體尤為重要。 研究目的： 構(gòu)建含報告基因的凋亡素基因真核表達載體。 研究方法： 對pMD18T-

3、VP3質(zhì)粒進行EcorI和BamHI雙酶切，回收366bp(含凋亡素基因完整序列)片段。對增強型綠熒光蛋白pEGFP-C2質(zhì)粒酶切，回收載體大片段。將凋亡素基因通過連接反應，連接到增強型綠熒光蛋白(EGFP)基因C末端的終止密碼前，并使兩者讀框不移位，構(gòu)建成pEGFP-VP3質(zhì)粒。并對其進行酶切分析和測序鑒定載體結(jié)構(gòu)。 研究結(jié)果： 通過對構(gòu)建對的pEGFP-VP3質(zhì)粒酶切、電泳，出現(xiàn)了366bp的電泳條帶，與凋亡素基因片