1、一般認(rèn)為成年哺乳動(dòng)物的心肌細(xì)胞系終末分化細(xì)胞，無或僅有有限的再生修復(fù)能力，一旦損傷，壞死的心肌只能由無功能的纖維瘢痕組織代替。心肌缺血引發(fā)的心肌細(xì)胞大量不可逆性缺失、存活的功能性細(xì)胞數(shù)量下降等多種因素最終將導(dǎo)致心力衰竭的發(fā)生，這已成為心血管疾病死亡的主要原因。盡管近些年有研究表明，成體心臟內(nèi)有可以增殖的心肌干細(xì)胞存在，但由于其增殖潛能有限，不足以修復(fù)受損的心肌組織。目前，心臟移植成為治療心肌壞死疾病的一有效途徑，但由于供體短缺、復(fù)雜的免

2、疫反應(yīng)及高額的治療費(fèi)用限制了其治療作用。因此，研究者及臨床都在尋找新的有效的治療方案。細(xì)胞移植為病損心肌的細(xì)胞修復(fù)及心功能恢復(fù)提供了一種全新的治療方案?？茖W(xué)家先后應(yīng)用多種類型的細(xì)胞，包括胎兒和新生兒心肌細(xì)胞、骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞及骨髓來源的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞移植治療心肌梗塞的動(dòng)物模型試驗(yàn)，并已取得了較好的進(jìn)展。但由于細(xì)胞來源有限，同時(shí)免疫排斥反應(yīng)等造成移植細(xì)胞的大量死亡，因此如何獲得大量細(xì)胞進(jìn)行移植以保證足夠量的細(xì)胞存活或改

3、善移植細(xì)胞的存活是目前面臨的主要問題。 胚胎畸瘤細(xì)胞(embryonalcarcinomacells，EC)細(xì)胞與胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcells，ES)在分化潛能、超微結(jié)構(gòu)、細(xì)胞表面抗原和生化特性等方面具有相似性，同時(shí)與ES細(xì)胞相比，EC細(xì)胞在無需飼養(yǎng)層和LIF(leukemiainhibitoryfactory,LIF)條件下培養(yǎng)即可保持未分化狀態(tài)，更易于培養(yǎng)，且易于進(jìn)行基因操作，而且通過分化培養(yǎng)過程EC細(xì)胞

4、可從惡性表型轉(zhuǎn)化為非惡性表型，因此EC細(xì)胞的研究應(yīng)用日益受到廣大研究者的青睞。P19EC細(xì)胞系是McBurney等從C3H/He小鼠畸胎瘤中分離得到的具有多分化潛能的胚胎性干細(xì)胞，其在體外培養(yǎng)中單層生長無需飼養(yǎng)層即可迅速大量擴(kuò)增，經(jīng)多次傳代仍保持胚胎干細(xì)胞特有標(biāo)記，如表面糖蛋白SSEA-1及轉(zhuǎn)錄因子Oct-3等。在體外，通過條件培養(yǎng)P19細(xì)胞被誘導(dǎo)為包括心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、神經(jīng)元等多種類型的細(xì)胞，且分化過程類似于胚胎細(xì)胞的早期分化。因

5、此P19細(xì)胞常被作為研究細(xì)胞早期發(fā)育的體外模型系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)表明，非黏附聚集或類胚體(embryonicbody,EB)形成與化學(xué)試劑(如DMSO、OT、T3、丁酸酯及6-硫鳥嘌呤等)誘導(dǎo)相結(jié)合可使P19細(xì)胞分化為自律跳動(dòng)的心肌細(xì)胞。P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化過程中，其發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)及電生理學(xué)特征基本模擬了正常小鼠心肌發(fā)育過程，被認(rèn)為是研究心肌細(xì)胞發(fā)育的良好體外模型系統(tǒng)，其向心肌細(xì)胞的分化過程日益引起人們的關(guān)注。目前P19細(xì)胞心肌細(xì)胞分化

6、的研究雖然取得了一些成果，但由于其較低的有效分化率以及各家所用誘導(dǎo)方法差異，限制了其廣泛應(yīng)用，能否建立高度標(biāo)準(zhǔn)化和最適宜培養(yǎng)條件是我們目前面臨的問題之一。 鑒于此，本課題擬通過應(yīng)用不同方法、不同化學(xué)試劑體外誘導(dǎo)P19細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化，觀察其分化過程中的形態(tài)學(xué)變化、心肌細(xì)胞早期轉(zhuǎn)錄因子及特異基因的表達(dá)，研究其生物學(xué)特性，摸索一種適宜P19細(xì)胞心肌細(xì)胞分化的方法，提高心肌細(xì)胞分化率，為建立高度標(biāo)準(zhǔn)化和最適宜的培養(yǎng)條件奠定基礎(chǔ)；摸索