1、目的：探討體外大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(marrow mesenchyma stem cells，MSCs)和心肌細(xì)胞(cardiomyocytes，CM)的分離、培養(yǎng)及5-氮胞苷(5-Aza)和共培養(yǎng)兩種方法對(duì)MSCs誘導(dǎo)分化為CM的作用；不同方法誘導(dǎo)MSCs分化后，MSCs在不同時(shí)間段分化為CM的能力及表達(dá)心肌細(xì)胞特異性標(biāo)記物縫隙連接蛋白43(Cx43)、肌鈣蛋白T(cTnT)的差別，為MSCs移植治療急性心肌梗死(acute myoc

2、ardial infarction，AMI)提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　 方法：在無(wú)菌條件下分離Wistar大鼠股骨骨髓，采用密度梯度離心與貼壁培養(yǎng)法相結(jié)合進(jìn)行MSCs培養(yǎng)、純化和擴(kuò)增，并行透射電鏡鑒定。在無(wú)菌條件下分離同種乳鼠心臟，采用差速貼壁法進(jìn)行CM培養(yǎng)、純化并行Cx43、cTnT的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。在獲得穩(wěn)定的細(xì)胞系后，選取生長(zhǎng)良好的第三代MSCs用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)標(biāo)記，分三組：①正常對(duì)照組：DA

3、PI-MSCs在普通培養(yǎng)基中生長(zhǎng)；②5-Aza誘導(dǎo)組：DAPI-MSCs加入5-Aza誘導(dǎo)，用不同濃度5-Aza分別作用不同時(shí)長(zhǎng)，以觀察最佳濃度和作用時(shí)間并行免疫組化鑒定cTnT、Cx43；③共培養(yǎng)組：與培養(yǎng)第3天的CM共培養(yǎng)。培養(yǎng)后1w、2w、3w、4w在倒置相差顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)變化及免疫細(xì)胞化學(xué)染色鑒定cTnT、Cx43，并計(jì)算其誘導(dǎo)陽(yáng)性率。
　　 結(jié)果：Wistar大鼠MSCs經(jīng)過(guò)分離、貼壁、純化能在體外進(jìn)行增

4、殖并保持良好的未分化潛能。同種乳鼠CM分離、貼壁后1天即能出現(xiàn)自發(fā)性搏動(dòng)，培養(yǎng)2～3d可長(zhǎng)成單層并形成細(xì)胞簇，并出現(xiàn)成簇細(xì)胞的同步搏動(dòng)。經(jīng)10μmol/L5-Aza持續(xù)作用15天的MSCs，4w時(shí)呈現(xiàn)出心肌細(xì)胞的典型改變，并有部分細(xì)胞出現(xiàn)自發(fā)搏動(dòng)，頻率為15～20次/分。MSCs傳至第3代時(shí)用DAPI標(biāo)記，標(biāo)記效率為100％，DAPI-MSCs在正常培養(yǎng)基中未見(jiàn)有細(xì)胞收縮，cTnT、Cx43表達(dá)陰性；在誘導(dǎo)組和共培養(yǎng)組，培養(yǎng)至4w時(shí)細(xì)胞

5、排列方向一致，成肌性排列，部分細(xì)胞呈現(xiàn)搏動(dòng)，誘導(dǎo)1w時(shí)cTnT、Cx43表達(dá)陰性，誘導(dǎo)2w時(shí)cTnT陽(yáng)性率為(9.98±1.67)％，Cx43陽(yáng)性率為(13.38±2.15)％，培養(yǎng)至4w時(shí)陽(yáng)性率升高，而且與3w，2w相比(P＜0.01)；共培養(yǎng)組第5天cTnT、Cx43就開(kāi)始表達(dá)了，隨著培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)，陽(yáng)性率逐漸升高，到第4w時(shí)cTnT、Cx43陽(yáng)性率分別為(88.3±1.33)％，(90.38±1.87)％，與3w，2w，1w相比(P