1、目前關(guān)于TFO對乙型肝為病毒復(fù)制影響的研究只有一篇報道,該研究就此設(shè)計一段能與HBV核心啟動子SP區(qū)(nt1734-1753)形成三螺旋的TFO并標(biāo)記上生物素,轉(zhuǎn)染HepG2.2.15細(xì)胞,檢測其轉(zhuǎn)染效率及其與HepG2.2.15細(xì)胞中HBV DNA及細(xì)胞中HBV RNA水平的影響;并利用裸鼠建立能夠穩(wěn)定分泌HBV的動物模型,初步研究HBV反基因在整體水平上對HBV復(fù)制的影響.該實驗分為四個部分:第一部分,HBV反基因的設(shè)計.目的:測定

2、HepG2.2.15細(xì)胞中HVB基因組的部分序列,根據(jù)測序結(jié)果及TFO設(shè)計原則設(shè)計出HBV反基因.結(jié)論:設(shè)計出TFO的序列為5'-CTCCTCCCCCAACTCCTCCC-3',命名為TFO20.第二部分,HBV反基因與HBV DNA的結(jié)合情況.目的:比較裸TFO20和脂質(zhì)體-TFO20復(fù)合物轉(zhuǎn)染效率的差別,觀察TFO20與HBV DNA結(jié)合的情況.結(jié)論:TFO20通過脂質(zhì)體包裹轉(zhuǎn)染可以很好地進(jìn)入HepG2.2.15細(xì)胞中并與HBV D

3、NA結(jié)合.第三部分,HBV反基因?qū)BV復(fù)制的體外抑制作用.目的:檢測TFO20對HepG2.2.15細(xì)胞或培養(yǎng)上清中HBV RNA、HBV DNA、HBsAg水平的影響.結(jié)論:脂質(zhì)體-TFO20復(fù)合物在體外能夠有效地抑制HBV復(fù)制,發(fā)揮抗病毒作用.第四部分,HBV反基因?qū)VB復(fù)制的體內(nèi)抑制作用.目的:檢測TFO20在整體水平上對HBV復(fù)制的影響.結(jié)論:脂質(zhì)體-TFO20復(fù)合物在整體水平上具有一定的抗乙型肝炎病毒作用,但有一定的局部毒