聚乙烯亞胺及其衍生物和納米顆粒對PCR優(yōu)化作用機制研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)是一種在體外模擬體內(nèi)DNA復制的核酸擴增技術(shù)。該技術(shù)是目前最常用、也最重要的分子生物學技術(shù)之一。目前PCR技術(shù)可以被應(yīng)用到測序,病原菌檢測,遺傳分析等領(lǐng)域。PCR技術(shù)有很高的靈敏性,但是它的特異性卻不是那么理想。PCR反應(yīng)的機理很復雜,在實際中受到一些因素的影響不可避免。在實際中,PCR會遇到低擴增、彌散、特異性差等問題。有報道證明PCR添加劑可以改善上述情況。

2、因此,研究增強PCR反應(yīng)效率和特異性的增強劑是必要的,研究優(yōu)化PCR反應(yīng)的機理是一個挑戰(zhàn)。
   本研究發(fā)現(xiàn)了一種新的增強劑:聚乙烯亞胺(PEI)能夠提高PCR反應(yīng)的特異性,并基于這一現(xiàn)象對添加劑對PCR的影響機理做了研究。
   本研究建立了兩套PCR體系用來檢驗增強劑對于PCR的作用。一套體系是以綠膿桿菌基因組為模板的二次擴增非特異體系;一套體系是以λDNA為模板擴增14.385kb的長片段體系。兩套體系加入了PEI

3、或其衍生物后,特異性均變好。
   文獻報道添加劑優(yōu)化PCR反應(yīng)有若干種機理假設(shè)。其中MWCNT優(yōu)化PCR反應(yīng)是基于它良好的熱傳導性能。本研究發(fā)現(xiàn)經(jīng)過PEI修飾的MWCNT,MWCNT-PEI有同樣的優(yōu)化效果,但用量卻少很多??紤]到PEI本身表面帶有陽離子。本人所在實驗室合成了表面帶正電的50%乙?;腜EI(PEI-Ac50)和100%乙?;疨EI(PEI-Ac)和其它衍生物。將它們加入到建立的非特異體系當中,最優(yōu)濃度PEI<

4、PEI-Ac50   本研究還研究了分子形貌對PCR反應(yīng)的影響。PEI是一種超支化的大分子,本身比較柔軟。本研究通過PEI包裹金顆粒(PEI-AU),使PEI

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