1、研究背景:21三體綜合征又名唐氏綜合征(Down syndrome,DS),是最常見的染色體病。目前該病尚無有效的治療方法,21三體患兒給社會和家庭帶來沉重的負擔。由于其確切病因及發(fā)病機制尚不明確,故做不到孕前干預,只能通過產(chǎn)前診斷及治療性流產(chǎn)以達到預防21三體患兒的出生。已出生21三體患兒的診斷主要是依靠外周血染色體核型分析技術,但是該技術存在周期長、操作煩瑣等缺點。目前21三體綜合征產(chǎn)前診斷主要通過絨毛膜取樣、羊膜腔穿刺、臍帶穿刺獲

2、取胎兒細胞進行染色體核型分析。但是這些技術存在成本高、細胞培養(yǎng)易失敗及嚴格的時間要求等缺點。近年發(fā)展起來的熒光原位雜交技術(FISH),具備快速的優(yōu)勢,對羊膜腔穿刺術是一個很好的補充,但因費用昂貴一般孕婦難以接受。以上方法雖然能診斷染色體非整倍體,卻對異常染色體的親源性不能判斷,而且不能檢測出由于21號染色體微小片段的重復引起的唐氏綜合征。隨著分子遺傳學技術的發(fā)展,多種分子遺傳學方法用于21三體的診斷。1995年,Fuentes等將21

3、三體綜合征的染色體的關鍵區(qū)域(DSCR)定位于21q22.1-q22.2。選取21號染色體上關鍵區(qū)域上的高度多態(tài)性的短串聯(lián)重復序列(short tandem repeat,STR)位點,利用聚合酶鏈反應(poly-merase chainreaction,PCR)技術擴增,非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳,硝酸銀染色技術,可以診斷21三體。該方法與傳統(tǒng)染色體分析相比優(yōu)點為省時、操作簡便、費用低等,而且STR-PCR技術可以檢測到關鍵區(qū)域微小片段

4、的重復引起的21三體綜合征,輔助染色體分析,可以提高唐氏綜合征的檢出率。研究目的探討STR-PCR技術在唐氏綜合征診斷中的應用價值,建立快速高效診斷唐氏綜合征的分子遺傳學方法,輔助外周血及羊水細胞染色體核型分析。
　　材料與方法：1.研究對象包括60例染色體核型分析結果為21三體患兒的外周血及其父母外周血和50例羊水標本及部分胎兒父母外周血。2.研究方法選取21號染色體關鍵區(qū)域及其附近的8個STR位點,引物序列來自GenBank。

5、用Chelex法提取標本DNA,利用聚合酶鏈反應技術擴增,非變性聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳,硝酸銀染色技術,通過觀察電泳條帶,診斷21三體。
　　實驗結果：1.60例21三體患兒58例被檢出,檢出率為96.7％。2.外周血標本中49例患兒額外的一條21號染色體來自母親,5例來自父親,4例不能判斷親源性。3.50例羊水標本檢出10例21三體患兒,9例與羊水細胞染色體分析結果一致,1例羊水細胞染色體核型分析結果為“46,XY”。8例多余的

6、21號染色體及1例部分21號染色體片段均來自母親,1例額外的染色體來自父親。4.綜合外周血及羊水結果8個STR位點D21S1409、D21S1433、D21S11、D21S1444、D21S1437、D21S1414、D21S1442、D21S1809的雜合度為:0.69、0.84、0.88、0.81、0.75、0.79、0.82、0.68,對21三體的檢出率為:30％、61％、67％、59％、43％、45％、58％、27％。聯(lián)合使用8

7、個位點對21三體的檢出率為97％。
　　結論：1.本研究所選取的8個STR位點具有高度多態(tài)性,具有較高的雜合度,是較好的遺傳標記。2.本研究聯(lián)合應用8個STR位點,對21三體綜合征的檢出率達到97％,表明STR-PCR技術是一種快速、簡便檢測21三體綜合征的方法,可以輔助染色體核型分析,對21三體綜合征進行診斷。3.STR-PCR技術可以判斷額外染色體起源,為進一步探討21三體綜合征。4.分子遺傳學方法的發(fā)展為21三體綜合征的診斷