1、研究背景:人促血液血管細(xì)胞生成素(Hemangiopoietin，HAPO)最初是我實(shí)驗(yàn)室從再生障礙性貧血(AA)患者的尿液中分離純化出的一種新型細(xì)胞因子。序列分析表明HAPO與蛋白多糖4(proteoglycan 4，PRG4)具有很高同源性，其基因位于染色體iq24-25。體外試驗(yàn)中，重組人HAPO(rhHAPO)能夠明顯促進(jìn)人骨髓單個(gè)核細(xì)胞、CD34+、 CDl33+、KDR+和CD34+/KDR+細(xì)胞的造血/內(nèi)皮方向分化，并刺激

2、鼠長(zhǎng)期培養(yǎng)起始細(xì)胞(LTC-ICs)的增殖；體內(nèi)試驗(yàn)中，皮下注射重組人HAPO能夠明顯增加上下常小鼠骨髓造血細(xì)胞，同時(shí)也可以增加受照射小鼠的生存率。此外，最新的實(shí)驗(yàn)表明，HAPO還可以通過(guò)P13K/AKT途徑抑制白血病細(xì)胞系MO7e凋亡。 目的:通過(guò)構(gòu)建表達(dá)HAPO基因的重組腺病毒，為進(jìn)一步研究HAPO對(duì)血液干/祖細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的促增殖作用奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:從胚胎肝臟總RNA中擴(kuò)增出HAPO基因后將其與鼠免疫球蛋

3、白信號(hào)肽Ig k相連，然后定向插入到穿梭質(zhì)粒pAd-track-CMV上，鑒定正確后，將pAd-track-CMV-HAPO與骨架質(zhì)粒pAdEasy-1在BJ5183細(xì)菌內(nèi)同源重組，獲得重組質(zhì)粒pAd-HAPO；采用脂質(zhì)體法pAd-HAPO轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞進(jìn)行包裝和擴(kuò)增重組腺病毒。采用PCR和Western blot對(duì)重組腺病毒進(jìn)行鑒定和檢測(cè)。 結(jié)果:PCR和測(cè)序分析顯示成功擴(kuò)增出HAPO基因；重組質(zhì)粒pAd-HAPO轉(zhuǎn)染293