1、[目的]先天性腎盂腎尿管連接部梗阻所致腎積水(hydronephrsis due to ureteropelvicjunction obstruction)是小兒常見(jiàn)的泌尿系畸形，近年來(lái)，產(chǎn)前超聲檢查發(fā)現(xiàn)約1000名胎兒中即有1例腎盂輸尿管連接處狹窄所致腎積水。男性多于女性，左側(cè)多于右側(cè)，雙側(cè)也不少見(jiàn)。本病發(fā)病率高且有逐漸增加趨勢(shì)，因此受到國(guó)內(nèi)外普遍重視。 近年來(lái)，由于組織學(xué)、組織化學(xué)、電鏡、免疫組化等研究手段的進(jìn)步，人們對(duì)其病

2、因、病理生理、組織與胚胎發(fā)育、診斷治療等研究均有很大進(jìn)步，有關(guān)先天性腎盂輸尿管連接部梗阻病因的研究已取得了重大進(jìn)展，揭示出形態(tài)學(xué)的異常主要表現(xiàn)在，輸尿管肌層發(fā)育障礙，平滑肌細(xì)胞相互分離，其細(xì)胞器不同程度異常，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞發(fā)育異?；蛉狈Γ喾N類型的神經(jīng)纖維增生或缺乏以及輸尿管壁起搏細(xì)胞異常，形態(tài)學(xué)的異常表明輸尿管神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育缺陷可能是輸尿管連接部.梗阻的根本病因；隨著組化及免疫組化的廣泛應(yīng)用，已證明輸尿管內(nèi)包含多種類型的神經(jīng)，并且這些神經(jīng)在

3、輸尿管蠕動(dòng)中起重要作用<'[1]>，Rolle<'[2]>等采用整裝制片技術(shù)用免疫組化方法研究豬的輸尿管神經(jīng)分布時(shí)發(fā)現(xiàn)腎盞、腎盂、腎盂輸尿管連接處及輸尿管間存在相互連接的神經(jīng)網(wǎng)，從而認(rèn)為輸尿管內(nèi)源性神經(jīng)在調(diào)節(jié)輸尿管蠕動(dòng)波的傳播中起作用；Knerr<'[3]>的研究發(fā)現(xiàn)腎盂輸尿管連接處狹窄段的氮能神經(jīng)元及神經(jīng)纖維明顯減少，nNos的mRNA表達(dá)明顯降低，使NO為NANL神經(jīng)抑制性作用減弱，使平滑肌松弛能力降低，使腎盂輸尿管連接處持續(xù)的收縮

4、而狹窄，導(dǎo)致腎積水。盡管目前已確定在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻處神經(jīng)系統(tǒng)異常包括神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、神經(jīng)纖維和cajal間質(zhì)細(xì)胞缺乏、P物質(zhì)、血管活性肽(VIP)能神經(jīng)及一氧化氮陽(yáng)性神經(jīng)叢缺乏，這些缺陷可導(dǎo)致病變部輸尿管功能障礙，但對(duì)病變部真正的病理生理機(jī)制還未完全明了。國(guó)際上對(duì)腎盂輸尿管連接部的神經(jīng)末梢即神經(jīng)肌肉連接(NMJ)的研究觀察報(bào)告較少。本課題采用免疫組織化學(xué)方法，用突觸素(synaptophysin，SY)和神經(jīng)絲蛋白(neurof

5、ilaments，NF)對(duì)先天性腎盂輸尿管連接部梗阻部神經(jīng)肌肉連接(NMJ)進(jìn)行研究，以探明其神經(jīng)肌肉連接的分布并探討其與先天性腎盂輸尿管連接部梗阻發(fā)病機(jī)制之間的關(guān)系。 [方法] 1．臨床資料：本組20例均經(jīng)臨床診斷為先天性腎盂輸尿管連接部梗阻癥，并經(jīng)術(shù)后病理診斷符合先天性腎盂輸尿管連接部梗阻，病理資料完整?；颊吣挲g1個(gè)月～10歲。男13例，女7例。10例正常UPJ組織標(biāo)本(來(lái)自尸檢)取自我院病理科存檔蠟塊作為對(duì)照。

6、 2.突觸素(SY)和神經(jīng)絲蛋白(NF)腎盂輸尿管連接部梗阻神經(jīng)肌肉連接(NMJ)標(biāo)記：羊抗鼠突觸素(SYN)、羊抗鼠神經(jīng)絲蛋白(NF)為特異性一抗，取正常對(duì)照組及先天性腎盂輸尿管連接部梗阻狹窄段標(biāo)本，10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、脫蠟、PBS液多次沖洗，每張切片滴加50μl的第一抗體，37℃孵育30～60min后4℃冰箱過(guò)夜，DAB顯色劑顯色，自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，中性樹膠封固. 3、結(jié)果判定方法：光鏡下觀察，突觸

7、素和神經(jīng)細(xì)絲陽(yáng)性反應(yīng)均為棕黃或棕色顆粒，分布于腎盂輸尿管連接部環(huán)形平滑肌層細(xì)胞間。變性的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞境界不清，部分節(jié)細(xì)胞細(xì)胞核消失。突觸素和神經(jīng)細(xì)絲的免疫反應(yīng)分布密度按以下標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行半定量分級(jí)：一(陰性)：無(wú)陽(yáng)性免疫反應(yīng)存在：+(弱陽(yáng)性)：肌層有少量陽(yáng)性表達(dá)，分布密度低：++(陽(yáng)性)：肌層有中等量的免疫反應(yīng)陽(yáng)性表達(dá)； +++(強(qiáng)陽(yáng)性)：肌層有大量的免疫反應(yīng)陽(yáng)性表達(dá)。 4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS10.0軟件，卡方

8、檢驗(yàn)。 [結(jié)果] 1、突觸素(SY)免疫反應(yīng)性表達(dá)：正常對(duì)照組突觸素的免疫反應(yīng)廣泛存在。在平滑肌層的神經(jīng)節(jié)周圍發(fā)現(xiàn)了較密集的突觸素免疫反應(yīng)，所有標(biāo)本均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在環(huán)行平滑肌層，存在密集的突觸素免疫反應(yīng)，所有標(biāo)本均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。先天性腎盂輸尿管連接部梗阻移行段，突觸素的免疫反應(yīng)與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)密切相關(guān)。在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞基本正常的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現(xiàn)了陽(yáng)性的突觸素免疫反應(yīng)，在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現(xiàn)了弱陽(yáng)性的突

9、觸素免疫反應(yīng)。在狹窄段神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺乏，其環(huán)形平滑肌層突觸素的免疫反應(yīng)呈陰性表達(dá)，少部分標(biāo)本呈弱陽(yáng)性表達(dá)。與正常對(duì)照組及腎盂輸尿管連接部梗阻狹窄段有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段相比，其差異均具有顯著性。 2、神經(jīng)細(xì)絲(NF)免疫反應(yīng)性表達(dá)：正常對(duì)照組的神經(jīng)細(xì)絲的免疫反應(yīng)廣泛存在。在平滑肌層的神經(jīng)節(jié)發(fā)現(xiàn)了較密集的神經(jīng)細(xì)絲免疫反應(yīng)，所有標(biāo)本均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，在環(huán)行平滑肌層，存在密集的突觸素免疫反應(yīng)，所有標(biāo)本均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻移

10、行段，神經(jīng)細(xì)絲免疫反應(yīng)亦與神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的形態(tài)與分布密切相關(guān)。在形態(tài)與分布基本正常的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現(xiàn)了陽(yáng)性的神經(jīng)細(xì)絲免疫反應(yīng)，在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞變性的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現(xiàn)了弱陽(yáng)性的神經(jīng)細(xì)絲免疫反應(yīng)。在病變段神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺乏，其平滑肌層神經(jīng)細(xì)絲的免疫反應(yīng)呈陰性表達(dá)，少部分標(biāo)本呈弱陽(yáng)性表達(dá)。與正常對(duì)照組及移行段有神經(jīng)節(jié)細(xì)胞段相比，其差異均具有顯著性。 [結(jié)論]正常神經(jīng)支配的平滑肌具有肌肉組織的共性，如興奮性、收縮性和傳導(dǎo)性，但平滑肌

11、的結(jié)構(gòu)、舒縮特性及神經(jīng)支配，都與骨骼肌、心肌有明顯差異。如果平滑肌失去正常的神經(jīng)支配會(huì)發(fā)生怎樣的變化呢?美國(guó)著名的生理學(xué)家Cannon早在20世紀(jì)上半葉對(duì)人體的很多器官如骨骼肌、平滑肌及許多腺體進(jìn)行了大量失神經(jīng)支配的研究，發(fā)現(xiàn)失去神經(jīng)支配的平滑肌因處于痙攣狀態(tài)而僵硬無(wú)蠕動(dòng)，且對(duì)刺激異常敏感。其研究結(jié)果被后人承認(rèn)并稱為Cannon定律(Cannon and Rosenblueth’S Law ofdenervation)。眾所周知內(nèi)源性神

12、經(jīng)元像運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元那樣通過(guò)軸突即節(jié)后纖維與環(huán)形平滑肌建立密切的聯(lián)系，其結(jié)合點(diǎn)稱為神經(jīng)肌肉連接(NMJ)，我們的研究就證明了在正常輸尿管的環(huán)行平滑肌區(qū)域存在豐富的突觸素。隨著研究的進(jìn)一步深入，逐漸發(fā)現(xiàn)病變段肽能神經(jīng)、一氧化氮神經(jīng)的異常，另外還有Cajal間質(zhì)細(xì)胞(起搏細(xì)胞)異常，這些異常表明輸尿管神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育缺陷可能是UPJO發(fā)病的根本原因。盡管目前關(guān)于先天性腎盂輸尿管連接部梗阻的病理生理尚有爭(zhēng)論，但綜合國(guó)外一些學(xué)者的研究及本課題的研究，先