1、三拗湯出自《太平惠民和劑局方·卷二》，方以麻黃為君，杏仁為臣，甘草調和麻杏宣降，配伍精當，主治感冒風邪，鼻塞聲重，語音不出；或傷風傷冷，頭痛目眩，四肢拘倦，咳嗽多痰，胸滿氣短：現代臨床報道以三拗湯及其類方治療感冒、支氣管炎、支氣管哮喘、咳嗽變異性哮喘及慢性咽炎引起的咽干、咽癢、干咳無痰或少痰等上呼吸道疾病。為了闡明傳統藥物治療疾病的物質基礎，探索中藥復方的化學的研究方法，本文選取本方為主要對象，進行了較系統的化學成分和分析方面的研究，同

2、時對其三個類方進行藥效物質基礎的研究，并對它們進行了藥理活性評價。 以三拗湯及其類方三拗湯加味，五拗湯和七拗湯的水煎劑揮發(fā)油為研究對象，運用氣相色譜-質譜聯用（GC-MS）技術、計算機檢索結合人工解析，從三拗湯揮發(fā)油中鑒定出50個化合物；從三拗湯加味揮發(fā)油中鑒定出86個化合物；從五拗湯揮發(fā)油中鑒定出105個化合物；從七拗湯揮發(fā)油中鑒定出84個化合物。其中復方中的主要成分基本來源于其組方藥材中的揮發(fā)性成分，但各方中皆有部分成分在單

3、味藥的揮發(fā)油中并未檢測到。為建立分析測定復方揮發(fā)性成分的方法奠定了基礎。 觀察三拗湯類方揮發(fā)油部分對呼吸道合胞病毒（RSV）誘導的哮喘小鼠氣道炎癥和Th1/Th2亞群平衡性的影響，比較各方的作用效果，篩選出最佳對證方劑。以45、135、405μg/mL Ach濃度激發(fā)時，與PBS對照組比，OVA/RSV組RL增高值（與基值比較）均明顯升高（P<0.05，P<0.01）；BALF中細胞總數、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒細胞炎性細

4、胞均顯著升高（P均<0.01）；BALF上清夜中IFN-γ及IL-4、IL-5含量均升高（P<0.01），其中IL-4、IL-5含量升高更為明顯（P均<0.01）；OVA/RSV組的肺組織病變程度十分嚴重（P均<0.01）。應用藥物后氣道反應性均顯著降低（P<0.05，P<0.01）；各給藥組細胞總數、巨噬細胞、淋巴細胞、嗜酸性粒細胞數量與OVA/RSV組比均明顯降低（P均<0.01），其中中性粒細胞降低更為顯著（P均<0.01）；各給

5、藥組IFN-γ、IL-4、IL-5的含量均較OVA/RSV組明顯降低（P<0.05，P<0.01）；藥物應用后能減輕支氣管周圍炎的病變程度；其中七拗湯揮發(fā)油部位對各種指證哮喘的指標均有較強的抑制作用。 對三拗湯化學成分利用各種色譜、光譜方法進行系統分離和結構鑒定，共得到化合物12個并鑒定了它們的化學結構，包括糖苷類2個，苦杏仁苷及甘草酸；黃酮類3個，芒柄花素，甘草素和異甘草素；甾醇類1個，β-谷甾醇；有機酸類3個，苯甲酸，琥珀酸

6、及正三十烷酸；生物堿類2個，麻黃堿及偽麻黃堿：以及苦杏仁苷的水解產物扁桃腈。其中所有化合物均為首次從三拗湯中分離得到。并對三拗湯各部位及所得到的化合物進行過氧化物酶體增值物激活受體PPARγ激動活性研究，其中三拗湯的乙酸乙酯、正丁醇部位都有一定活性，化合物中芒柄花素、甘草素、異甘草素有較強活性，以芒柄花素的活性最好，與陽性藥物曲格列酮激活作用相當，為天然的PPARγ受體。 采用HPLC/ESI-MS聯用技術分析三拗湯及其類方效應

7、部位，通過質譜數據，紫外吸收光譜推測出其中34個主要成分的可能結構，并與對照品比對，確認甘草素、異甘草素、芒柄花素及苯甲酸的化學結構。根據此實驗結果，利用HPLC技術對三拗湯及其類方進行了在線分析，同時測定三拗湯及其類方中有效部位的效應成分扁桃腈、苯甲酸、甘草素、異甘草素和芒柄花素濃度分別在5.3～106，1.1～22，2.1～41.2，0.60～11.9，0.16～3.28μg/mL范圍內均呈良好線性關系（r≥0.9998）；各組分低

8、、中、高濃度的平均加樣回收率均在99.0～101之間，RSD均小于2.0％。重復性良好，RSD均小于1.5％（n=6）。HPLC方法測定三拗湯及其類方效應部位中不同類型的5個組分的含量，方法準確可靠，重復性良好，為方劑中多種類型復雜效應物質的分析評價提供了參考。 論文主要特色及創(chuàng)新點： 1.在本課題實施過程中逐步形成了從藥材-方劑-類方的研究思路和基本認識，從中探索揭示方劑及類方配伍規(guī)律和科學內涵的有效途徑。 2

9、.首次運用GC-MS的方法以分區(qū)段方式對三拗湯、三拗湯類方以及十味組方藥材的揮發(fā)性成分進行系統的比較分析。并研究三拗湯及其類方的揮發(fā)性成分對RSV誘導的哮喘小鼠氣道炎癥和Th1/Th2亞群平衡性的影響，比較各方的作用效果，層層遞進，揭示復方中單味藥材與復方的關系，篩選出最佳對證方劑。 3.通過生物效應跟蹤評價，闡明三拗湯效應部位中激動PPARγ的主要活性成分可能為芒柄花素、甘草素和異甘草素。采用HPLC/ESI-MS，對三拗湯效