1、分類 號 : Q341密 級 :安徽省黃精種質資源遺學 號 : S10090706262傳多樣性的 ISSR分析主 艸學位論文Ge n e t i cE)i v e r s i t yo f An h u ig e r m p l a s mr e s o u r c e so fPJJy g J刀″Ⅱ 〃 b yISSR研 究 生: 張紅梅指 導 教 師: 項艷 教授 ~申請 學 位 門類 級

2、 別: __ˉ 農學 碩士專 業(yè) 名 稱: 園林植物與觀賞園藝研 究 方 向: 園林植物遺傳育種所 在 學 院: 林學與園林學院答辯委員會主席: 彡 钅 饣2013壟F6月I 摘 要 本文利用 ISSR 技術對安徽省黃精屬植物進行了遺傳多樣性分析。主要包括以下品種：黃精(Polygonatum sibiricum)、多花黃精(Polygonatum cyrtonema Hua)、長梗黃精 (Polygon

3、atum filipes Merr)、湖北黃精(Polygonatum zanlanscianense Pamp.)、玉竹(Polygonatum odoratum (Mill.) Druce)。 通過 ISSR 分子標記方法， 從 DNA 水平對安徽省黃精屬不同地區(qū)的14種植物進行遺傳多樣性分析， 并根據(jù)特異性條帶利用UPGMA方法構建聚類樹狀圖進行聚類分析，獲得以下主要結果： 1、 以多花黃精作為研究對象， 選用改進的 CTAB 法

4、提取黃精葉片的基因組 DNA，瓊脂糖凝膠電泳檢測和 OD 值檢測表明：提取的 DNA 條帶均在 23kb 左右，OD260/ OD280 均在 1.6-2.0 之間， 符合分子生物學實驗的要求， 確定了適合的黃精屬植物基因組 DNA 提純的方法。 2、采用 5 因素 4 水平的正交實驗，通過對影響 PCR 反應的 TaqDNA 聚合酶、buffer(Mg2+)、模板 DNA、dNTP 和引物等因素的篩選，建立了黃精屬植物最適的ISSR-

5、PCR 反應體系，即 25 µ l 的反應體系中含有 1.0 U Taq DNA 聚合酶，3.5 mmol/L buffer (Mg2+)，80 ng 模板 DNA，0.08 mmol/L dNTP 和 0.16 µ mol/L 引物。 3、在 100 條 UBC 引物(UBC801~UBC899)中初選出 60 條適合黃精植物基因組PCR 擴增的引物，利用上述體系通過梯度 PCR 反應確定了各引物的最適退火溫度，最

6、終篩選出 10 條效果最優(yōu)的 ISSR 引物。 4、 利用確定的 10 條效果最優(yōu)的 ISSR 引物對提取的 14 種黃精屬植物的 DNA 進行 PCR 擴增，共擴增出 115 條重復性高的、清晰的條帶，其中多態(tài)性的條帶為 114條，多態(tài)性百分率為 99%。每個引物擴增出的條帶平均為 10~13 條，其中條帶重現(xiàn)率為 92%。擴增條帶的大小主要集中在 200~3000bp。 5、 利用 NTSYS-pc2.10e 聚類分析軟件對 14

7、個黃精屬植物的 Jaccard 遺傳相似系數(shù)進行了計算，并利用 UPGMA 方法構建了聚類樹狀圖。在 14 個黃精屬植物中，親緣關系最近的為采自九華山和黃山的玉竹，遺傳相似系數(shù)為 0.6870，遺傳距離為0.3754，說明了不同地域的分布并沒有讓其產生教大的遺傳變異。親緣關系最遠的為采自九華山、黃山的長梗黃精和采自合肥林科院的黃精，遺傳相似系數(shù)為 0.4261，遺傳距離為 0.8531，說明了它們之間遺傳變異程度較大。 6、利用 POP

8、GENE version 1.32 軟件對四個亞類進行居群遺傳多樣性和居群遺傳結構的分析，得出本實驗測定的各遺傳參數(shù)為：有效等位基因數(shù) Ne 為 1.5888，期望雜合度 H 為 0.3489， Shannon 信息指數(shù) I 為 0.5229， 多態(tài)性條帶百分率 PPB 為 99.13%。黃精四個亞類種水平的基因多樣性 Ht= 0.3500, 居群內基因多樣性 Hs =0.1985,居群間基因分化系數(shù) Gst = 0.4328, 基因流