1、目的：
　　 利用ISSR和SRAP分子標(biāo)記技術(shù)評(píng)價(jià)全國不同產(chǎn)地和表型的半夏居群種質(zhì)資源和親緣關(guān)系，為正確的保護(hù)和利用半夏種質(zhì)資源及對(duì)篩選抗倒伏、抗病能力強(qiáng)的品種和解決栽培品種種質(zhì)退化的問題提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1提取半夏標(biāo)本總DNA。
　　 2將36個(gè)不同產(chǎn)地和表型的半夏居群分別配成不同表型半夏基因池、不同產(chǎn)地基因池和不同產(chǎn)地和表型的半夏基因池。
　　 3 ISSR分析：對(duì)80條I

2、SSR引物進(jìn)行初選，然后用其中適合的8個(gè)ISSR引物進(jìn)行ISSR分析。
　　 4 SRAP分析：①采用正交設(shè)計(jì)和綜合評(píng)分法對(duì)半夏SRAP-PCR反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化；②對(duì)100對(duì)SRAP引物進(jìn)行初選，然后用其中適合的14對(duì)SRAP引物進(jìn)行SRAP分析。
　　 結(jié)果：
　　 1 ISSR分析：①不同表型半夏ISSR聚類分析：用8個(gè)ISSR引物擴(kuò)增8個(gè)不同表型半夏和掌葉半夏，共擴(kuò)增出106條帶，其中87條具有多態(tài)性，多態(tài)

3、位點(diǎn)百分率為82.1％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為11-17條，平均擴(kuò)增條帶數(shù)為13.3條。除引物UBC8808和UBC820外，其余6個(gè)引物均能擴(kuò)增出掌葉半夏的特征性條帶，共計(jì)18條。8種表型半夏種內(nèi)共擴(kuò)增出88條帶，其中55條具有多態(tài)性，多態(tài)位點(diǎn)百分率為62.5％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為9-14條，平均擴(kuò)增條帶數(shù)為6.9條。從Jaccard相似系數(shù)矩陣中可知各表型半夏間的相似系數(shù)在0.447-0.833之間，掌葉半夏與各表型半夏的相似系數(shù)均

4、在0.372以下，遠(yuǎn)低于各表型半夏間的相似系數(shù)。②不同產(chǎn)地半夏ISSR聚類分析：用8個(gè)ISSR引物擴(kuò)增13個(gè)不同產(chǎn)地半夏，共擴(kuò)增出83條帶，其中65條具有多態(tài)性，多態(tài)位點(diǎn)百分率為78.3％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為7-16條，平均擴(kuò)增條帶數(shù)為10.4條。從聚類圖上可看出不同產(chǎn)地半夏可分為湖北省內(nèi)與省外兩支。③不同產(chǎn)地及不同表型半夏ISSR聚類分析：用8個(gè)ISSR引物擴(kuò)增35個(gè)不同產(chǎn)地及表型的半夏，共擴(kuò)增出104條帶，其中97條具有多態(tài)性，多

5、態(tài)位點(diǎn)百分率為93.3％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為8-20條，平均擴(kuò)增條帶數(shù)為13.0條。2 SRAP分析：①優(yōu)化反應(yīng)體系結(jié)果為：25μL反應(yīng)體系中含有1× buffer、Taq酶1.0U、Mg2+2.5mmol·L-1、dNTPs0.1 mmol/L-1、模板DNA50ng、引物0.8μmol/L-1。②不同表型半夏SRAP聚類分析：用14對(duì)SRAP引物擴(kuò)增8個(gè)不同表型半夏和掌葉半夏，共擴(kuò)增出259條帶，其中168條具有多態(tài)性，多態(tài)位點(diǎn)百

6、分率為64.9％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為10-29條，平均擴(kuò)增條帶數(shù)為18.5條。除引物Me27+Em13外，其余6個(gè)引物均能擴(kuò)增出掌葉半夏的特征性條帶，共計(jì)36條。8種表型半夏種內(nèi)共擴(kuò)增出224條帶，其中53條具有多態(tài)性，多態(tài)位點(diǎn)百分率為23.7％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為10-28條，平均擴(kuò)增條帶數(shù)為3.8條。從Jaccard相似系數(shù)矩陣中可知各表型半夏間的相似系數(shù)在0.779-0.994之間，掌葉半夏與各表型半夏的相似系數(shù)均在0.450

7、以下，遠(yuǎn)低于各表型半夏間的相似系數(shù)。③不同產(chǎn)地半夏SRAP聚類分析：用14對(duì)SRAP引物擴(kuò)增13個(gè)不同產(chǎn)地半夏，共擴(kuò)增出237條帶，其中33條具有多態(tài)性，多態(tài)位點(diǎn)百分率為13.9％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為12-29條，平均擴(kuò)增條帶數(shù)為16.9條。④不同產(chǎn)地及不同表型半夏SRAP聚類分析：對(duì)35個(gè)不同產(chǎn)地及表型的半夏進(jìn)行SRAP擴(kuò)增，共擴(kuò)增出171條帶，其中27條具有多態(tài)性，多態(tài)位點(diǎn)百分率為15.8％。各引物擴(kuò)增的條帶數(shù)為9-19條，平均擴(kuò)

8、增條帶數(shù)為13.2條。
　　 結(jié)論：
　　 1 ISSR分析：①半夏ISSR帶型表現(xiàn)出很高的多態(tài)性，而且可重復(fù)性較好，說明該ISSR分子標(biāo)記是評(píng)估半夏遺傳多樣性的有效方法。②從聚類圖上可區(qū)分不同表型和不同產(chǎn)地的半夏，產(chǎn)地往往先于表型聚類在一起。2 SRAP分析：①SRAP分子標(biāo)記是評(píng)估半夏遺傳多樣性的有效方法。②從聚類圖上可區(qū)分不同表型和不同產(chǎn)地的半夏，產(chǎn)地往往先于表型聚類在一起。
　　 3 ISSR技術(shù)和SRA