1、觀賞南瓜又稱玩具南瓜，原產(chǎn)于熱帶地區(qū)，是葫蘆科南瓜屬一年生蔓性草本植物，多屬于美洲南瓜類型。觀賞南瓜是以果實器官作為觀賞對象的，外形乖巧美觀，色彩豐富；適合種植在溫室、大棚等保護設(shè)施內(nèi)，也適合園林綠化、造型布景之用，具有獨特的觀賞性和利用價值，因此，引起了人們的廣泛關(guān)注。 觀賞南瓜種質(zhì)資源遺傳多樣性研究，有利于觀賞南瓜資源的收集、保存、鑒定、創(chuàng)新和合理利用。分子標記能直接從DNA水平反映種質(zhì)之間的遺傳差異，是研究植物遺傳多樣性的

2、有效工具。RAPD和ISSR標記具有簡單、快速、無種屬特異性、節(jié)約成本的優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于遺傳多樣性和植物分類研究。本研究應(yīng)用RAPD和ISSR標記相結(jié)合，運用聚類分析對28份觀賞南瓜材料的遺傳多樣性進行了研究。主要結(jié)果如下： 1.建立了優(yōu)化的觀賞南瓜RAPD和ISSR反應(yīng)分析體系。20μLRAPD反應(yīng)體系為2.0mmol/LMg2+、0.15mmol/L dNTPs、1.0U TaqDNA聚合酶、20ng模板DNA和10pmo

3、l引物：20μL ISSR反應(yīng)體系為2.0mmol/L Mg2+、0.25mmol/L dNTPs、0.5U TaqDNA聚合酶、20ng模板DNA和10pmol引物。 2.從300條RAPD引物中篩選出12條引物分別對28份觀賞南瓜基因組DNA進行PCR擴增，共擴增出89條帶，多態(tài)性條帶數(shù)為73，多態(tài)性比例為82％。反應(yīng)擴增的條帶分子量一般在300～3000bp范圍內(nèi)。每個引物擴增的條帶數(shù)目在5～11條之間，平均每條引物擴增出

4、7.4條帶?；赗APD數(shù)據(jù)估計觀賞南瓜種質(zhì)材料的遺傳相似系數(shù)(GS)結(jié)果，28份材料之間的GS值在0.31～0.99之間，平均為0.73，由供試材料RAPD分子標記數(shù)據(jù)的相似系數(shù)聚類分析所繪出的樹狀聚類，當GS=0.72～0.76時，可將28份觀賞南瓜種質(zhì)劃分為四人類。 3.從100條ISSR引物中用篩選出的13條引物分別對28份觀賞南瓜基因組DNA進行PCR擴增，共擴增出93條帶，多態(tài)性條帶數(shù)為81，多態(tài)性比例為86％。反應(yīng)

5、擴增的條帶分子量一般在300～3000bp范圍內(nèi)。每個引物擴增的條帶數(shù)目在4～11條之間，平均每條引物擴增出7.15條帶。基于ISSR數(shù)據(jù)估計觀賞南瓜種質(zhì)材料的遺傳相似系數(shù)(Gs)結(jié)果，28份材料之間的GS值在0.33～0.99之間，平均為0.68。由供試材料ISSR分子標記數(shù)據(jù)的相似系數(shù)聚類分析所繪出的樹狀聚類圖。當GS=0.67～0.70時，可將28份觀賞南瓜種質(zhì)劃分為三人類。 4.將RAPD、ISSR的遺傳相似系數(shù)矩陣進行

6、相關(guān)分析，RAPD與ISSR相關(guān)系數(shù)為0.862，達極顯著水平。說明經(jīng)過優(yōu)化后的RAPD和ISSR技術(shù)較為穩(wěn)定，表明應(yīng)用這兩種技術(shù)對觀賞南瓜進行遺傳多樣性分析具有較高的一致性和可信度。 5.基于RAPD和ISSR混合數(shù)據(jù)估計觀賞南瓜種質(zhì)的遺傳相似系數(shù)(GS)結(jié)果，28份觀賞南瓜材料之間的GS值在0.34～0.97之間，平均為0.70，處于RAPD和ISSR之間，但差別不大。由供試材料的RAPD和ISSR兩種實驗方法的數(shù)據(jù)混合后的