1、該研究的主要方法和結(jié)果:第一部分:方法:3月齡SD大鼠予鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射,誘導(dǎo)糖尿病模型.將大鼠隨機(jī)分為4組:(1)正常對(duì)照組(CN);(2)糖尿病對(duì)照組(DM);(3)小劑量Mel治療組(DM+Mel<,1>,0.2mg/kg.d);(4)大劑量Mel治療組(DM+Mel<,2>,5mg/kg.d).檢測(cè)Mel治療0、4、8周時(shí)的體重、血糖、血甘油三酯、總膽固醇水平作為一般情況及血生化指標(biāo);檢測(cè)血肌酐、尿肌酐、尿蛋白排泄量

2、,計(jì)算肌酐清除率作為腎功能指標(biāo);計(jì)算腎重/體重比值、電鏡檢查、PAS染色、HE染色光鏡下運(yùn)用半自動(dòng)影像分析系統(tǒng)測(cè)量PAS染色陽(yáng)性面積、腎小球面積和小球內(nèi)細(xì)胞數(shù)作為形態(tài)學(xué)指標(biāo).第二部分:方法:選用大鼠系膜細(xì)胞株,依據(jù)培養(yǎng)基中葡萄糖濃度的不同,將其分為低糖組(5mmol/L)、高糖組(20mmol/L),在高糖組中加入不同濃度Mel(10<'-13>、10<'-11>、10<'-9>、10<'-7>、10<'-5>mmol/L),培養(yǎng)72小

3、時(shí),應(yīng)用3-(4,5)-雙甲基-2-噻唑-(2,5)-二苯基溴化四氮唑藍(lán)(MTT)法觀察高糖環(huán)境對(duì)大鼠系膜細(xì)胞株增殖的影響以及Mel干預(yù)對(duì)系膜細(xì)胞增殖影響的情況.分別在Mel的生理濃度(10<'-11>mmol/L)及藥理濃度(10<'-7>mmol/L)組加用Mel的受體阻斷劑Luzindole,觀察其對(duì)Mel作用的影響.第三部分:方法:1.體內(nèi)試驗(yàn)部分:各組大鼠予Mel治療4周、8周時(shí)眶后靜脈取血,比色法測(cè)定糖尿病大鼠紅細(xì)胞SOD活

4、性、全血GSH-Px活性、血漿MDA含量作為系統(tǒng)氧化應(yīng)激狀態(tài)的監(jiān)測(cè)指標(biāo);予Mel治療8周后處死,取腎臟組織,制備勻漿,測(cè)定大鼠腎臟SOD活性、GSH-Px活性、MDA含量作為腎臟局部氧化應(yīng)激狀態(tài)的監(jiān)測(cè)指標(biāo).2.體外試驗(yàn)部分:選用大鼠系膜細(xì)胞株,將其分為低糖對(duì)照組(5mmol/L)組、高糖對(duì)照組(20mmol/L)、高糖(20mmol/L)+生理濃度Mel(10<'-11>mmol/L)組、高糖(20mmol/L)+藥理濃度Mel(10<

5、'-7>mmol/L)組四組.培養(yǎng)72小時(shí)后,觀測(cè)培養(yǎng)液中抗氧化酶活性和脂質(zhì)過氧化物水平的改變及Mel對(duì)其影響,作為體內(nèi)試驗(yàn)的氧化應(yīng)激狀態(tài)的監(jiān)測(cè)指標(biāo).第四部分:方法:1.體內(nèi)試驗(yàn)部分:各組大鼠予Mel治療8周后處死,取腎皮質(zhì)抽提總RNA,以TGF-β<,1>引物進(jìn)行RT-PCR半定量檢測(cè)TGF-β<,1> mRNA表達(dá)量;取右側(cè)腎組織行TGF-β<,1>免疫組化染色,半自動(dòng)圖像分析儀分析TGF-β<,1>蛋白表達(dá)情況.作為糖尿病大鼠腎臟

6、增殖的細(xì)胞因子改變指標(biāo).2.體外試驗(yàn)部分:選用大鼠系膜細(xì)胞株,將其分為低糖對(duì)照組(5mmol/L)、高糖對(duì)照組(20mmol/L)、高糖(20mmol/L)+生理濃度Mel(10<'-11>mmol/L)組、高糖(20mmol/L)+藥理濃度Mel(10<'-7>mmol/L)組四組.培養(yǎng)72小時(shí)后,抽提總RNA,以TGF-β<,1>引物進(jìn)行RT-PCR半定量檢測(cè)各組細(xì)胞TGF-β<,1> mRNA表達(dá)量變化,觀測(cè)高糖環(huán)境對(duì)TGF-β<

7、,1> mRNA表達(dá)的作用及Mel干預(yù)的效應(yīng).結(jié)論:1.Mel能有效糾正糖尿病大鼠脂代謝紊亂、改善腎功能,減緩腎小球硬化的進(jìn)展,顯示一定的腎保護(hù)作用.2.Mel可抑制高糖環(huán)境下大鼠系膜細(xì)胞的增殖,其作用可被Mel受體阻斷劑部分逆轉(zhuǎn).3.Mel能有效抑制糖尿病大鼠腎臟氧化應(yīng)激反應(yīng);藥理劑量Mel可改善高糖環(huán)境下大鼠腎系膜細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài);腎組織過氧化產(chǎn)物堆積、內(nèi)在抗氧化酶活性降低在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用.4.Mel能在蛋白質(zhì)水