1、目的：
　　 免疫球蛋白樣轉錄子(ILTs)是最近發(fā)現(xiàn)的一類受體家族，主要表達于髓系和淋巴系細胞表面，其成員通過與相應配體結合，在誘導免疫活性T、NK細胞分別轉化為Treg和耐受性NK細胞，促進NK、T細胞的凋亡等發(fā)揮著廣泛的免疫調節(jié)作用。環(huán)孢菌素A(CsA)是一種臨床常用的免疫抑制劑，多用于器官移植后抗排斥反應，治療自身免疫性疾病等。以往研究表明抑制性受體ILT3和ILT4可使宿主對外源性的器官產生耐受，上調其表達可提高移植成

2、功率。關于CsA對機體免疫功能的調節(jié)以往雖有研究，但該藥物對人淋巴細胞ILTs表達的影響未見報道。本研究在前期工作的基礎上，體外實驗中以自然殺傷細胞(NKL)為研究對象，分別用不同濃度CsA處理NKL細胞，檢測用藥前后細胞抑制性受體ILT3和ILT4表達、NKL細胞增殖及其對腫瘤細胞殺傷功能的變化;同時，動態(tài)檢測腎移植患者（使用CsA抗排斥反應）手術前后外周血淋巴細胞ILT3和ILT4mRNA的表達變化，比較腎移植術后穩(wěn)定組與排斥組IL

3、T3/4表達差異，分析ILT3/4的表達與腎移植術后排斥反應的聯(lián)系，探討ILT3/4在診斷排斥反應中的應用。該研究對探索CsA的作用機制及其合理應用具有重要參考價值，對腎移植術后排斥反應的早期診斷具有顯著的臨床意義。
　　 方法：
　　 一、體外實驗:
　　 1、分別用濃度為5、10、15mg/L的CsA處理NKL細胞12h、24h、36h后，采用定量PCR和流式細胞術，分別檢測用藥前后NKL細胞抑制性受體ILT

4、3和ILT4mRNA和蛋白的表達;
　　 2、測定腫瘤細胞BGC-823和JEG-3上HLA-G的表達，并選擇經濃度為15mg/L的CsA處理36h前后的NKL細胞分別與表達不同程度HLA-G的腫瘤細胞BGC-823和JEG-3共培養(yǎng)，采用MTT法檢測藥物處理前后NKL細胞對腫瘤細胞BGC-823和JEG-3殺傷活性變化;
　　 3、MTT法檢測經不同濃度CsA處理前后的NKL細胞增殖活性的變化。
　　 二、臨床

5、實驗:實驗分組包括實驗組、健康對照組及術前對照組。其中實驗組來自齊魯醫(yī)院器官移植中心接受腎移植的患者，根據患者術后恢復情況又分為術后排斥組和術后穩(wěn)定組;隨機選取山東大學齊魯醫(yī)院健康體檢職工作為健康對照組。采用實時熒光定量PCR法檢測腎移植患者手術前后（術后1天、1周、3周、1個月、兩個月及3個月）、發(fā)生排斥反應前后（排斥發(fā)生時、發(fā)生后1天、3天、7天）及健康對照組外周血淋巴細胞ILT3和ILT4mRNA的表達變化。同時檢測各研究對象同期

6、外周血CsA藥物濃度及血清肌酐和尿素氮等指標，分析ILT3和ILT4在移植排斥反應的發(fā)生發(fā)展及臨床診斷中的作用。所取標本均經研究對象同意，符合山東大學齊魯醫(yī)院倫理委員會要求。
　　 結果：
　　 1、CsA可上調NKL細胞ILT3和ILT4的表達，且上調幅度與處理時間、藥物濃度相關。其中15mg/L的CsA處理NKL細胞36h后，細胞ILT3和ILT4表達明顯升高;
　　 2、對同一種靶細胞，經濃度為15mg/L

7、的CsA處理后的NKL細胞殺傷效率較處理前明顯下降;藥物處理前后的NKL對低表達HLA-G的BGC-823細胞殺傷力均強于對高表達HLA-G的JEG-3細胞的殺傷;
　　 3、各濃度組CsA不同程度的抑制NKL細胞的增殖，同一時間段，隨著CsA濃度的增大，對NKL細胞增殖的抑制作用逐漸增強，呈一定的劑量效應;且同一濃度處理NKL細胞時間越長，抑制其增殖的作用越明顯;
　　 4、臨床實驗中，實驗組與對照組中不同個體ILT3

8、/4mRNA表達水平高低不一，存在較大個體差異。但整體來看，術前對照組ILT3/4mRNA表達與健康人對照組無明顯統(tǒng)計學差異;
　　 5、術后功能穩(wěn)定組:術后1天，ILT3mRNA表達較術前無明顯變化，ILT4mRNA略升高;術后7天ILT3/4mRNA與術前水平相比均有升高;隨后，ILT3/4mRNA表達水平持續(xù)上升，于術后大約一個月達到最高表達水平;術后2個月及3個月，ILT3/4表達水平基本保持穩(wěn)定，分別約為術前的1.69

9、～1.73、2.06～2.12倍;
　　 6、術后排斥反應組:從術后到排斥反應發(fā)生前各時間段ILT3/4mRNA表達水平與穩(wěn)定組相應時間段無顯著差異;出現(xiàn)排斥時ILT3/4mRNA的表達水平明顯低于排斥前穩(wěn)定水平，同時也略低于術前水平。隨后，患者在使用適量免疫抑制劑后ILT3/4的表達呈現(xiàn)不同程度的上升。
　　 結論：
　　 1、CsA可上調NKL細胞上ILT3和ILT4的表達，并通過ILT3和/或ILT4參與對

10、NKL細胞殺傷及增殖功能的調節(jié)，同時ILT3和/或ILT4可與HLA-G相互作用影響NKL細胞對腫瘤的殺傷功能。另外，ILT3/4上調幅度與藥物濃度等相關。這將為探討CsA作用機制及其在臨床上的合理應用提供重要參考價值;
　　 2、動態(tài)檢測腎移植患者術前、術后及排斥反應發(fā)生前后外周血淋巴細胞ILT3/4表達變化結果發(fā)現(xiàn):移植術后穩(wěn)定組患者外周血淋巴細胞ILT3/4較術前均呈現(xiàn)不同程度的表達上升。而排斥組患者出現(xiàn)排斥反應時其ILT