1、抗氧化劑是一種廣泛應(yīng)用的重要食品添加劑，目前使用的主要是化學(xué)合成物，存在蓄積性致病風(fēng)險。因此，研究者把目光轉(zhuǎn)向天然抗氧化劑的開發(fā)和利用。研究表明，蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物中存在多種具抗氧化活性的肽類，它們具較強抑制生物大分子過氧化和清除體內(nèi)自由基的功能。酶法制備抗氧化肽具備條件溫和，降解位點特異性和重復(fù)性高，對蛋白質(zhì)生物活性破壞較小等優(yōu)點，已成為天然抗氧化劑研究領(lǐng)域內(nèi)的新熱點。酶解底物蛋白多利用植物和水產(chǎn)類等，蛋白含量高、資源豐富的昆蟲類也逐漸受

2、到重視?？寡趸挠型_發(fā)成為新型天然抗氧化劑和新型功能食品，在醫(yī)藥、化妝品等行業(yè)也有巨大的潛在市場。 本論文以人工飼養(yǎng)的家蠅(Musca domestica)幼蟲(俗稱蠅蛆)為原材料，選用三種食品級商品酶：木瓜蛋白酶、堿性蛋白酶和復(fù)合風(fēng)味酶，采用分段法水解蠅蛆蛋白制備具有抗氧化活性的水解產(chǎn)物，經(jīng)分離純化工藝處理后得到了較理想的混合小肽類產(chǎn)物。 根據(jù)蛋白酶的特性應(yīng)用分段法進行復(fù)合水解，第一階段由內(nèi)肽酶木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶

3、水解蠅蛆蛋白，第二階段加入內(nèi)肽&端肽混和酶復(fù)合風(fēng)味酶，達(dá)到進一步水解和改善風(fēng)味的目的。通過單因素試驗設(shè)計和正交實驗設(shè)計，對酶水解條件進行了優(yōu)化，水解度由文獻(xiàn)報道的42％提高到了60％。 利用活性白土對水解產(chǎn)物進行脫色處理，通過正交實驗得到最佳脫色條件：活性白土用量8％(w：v)，室溫下脫色2hr，脫色率63.3±1.5％，產(chǎn)物抗氧化活性最大，0.015g/ml該產(chǎn)物對DPPH自由基的清除率達(dá)到72.1％。 脫色產(chǎn)物分別用

4、Sephadex G—25凝膠過濾層析和50kDa、10kDa超濾裝置進行純化。結(jié)果表明，凝膠過濾層析法耗時長，分離效果差，且大大稀釋了產(chǎn)物，不利于后續(xù)濃縮處理。脫色產(chǎn)物先后用50kDa、10kDa超濾裝置進行二次超濾分級分離純化，經(jīng)Tricine—SDS—PAGE檢驗，產(chǎn)物為分子量小于16kDa、分布集中于2-8kDa的肽類混合物。真空冷凍干燥后的產(chǎn)品為淺黃色粉末。 功能分析結(jié)果顯示，濃度為25mg/ml時，對·O2-的清除率

5、在50％左右，相當(dāng)于1mg/ml的Vc(純度>99％)：2.5mg/ml該產(chǎn)品對DPPH自由基清除率達(dá)60％，相當(dāng)于0.025mg/ml的Vc和0.0125mg/ml食品級的人工合成抗氧化劑TBHQ的作用效果；純化產(chǎn)物濃度為1mg/ml時，對·OH清除率達(dá)到50％，約相當(dāng)于0.05mg/ml Vc的作用：20mg/ml的純化產(chǎn)物即對亞油酸過氧化具有較好的抑制效果，接近20μg/ml TBHQ的作用效果，表明純化產(chǎn)物可以作為抗氧化劑添加于