1、目的：在β-葡聚糖作用下的骨髓單核細胞能夠促進血管原性生長因子的分泌以及內在的可能機制。 方法：從280克-320克六只雄性Lewis大鼠中提取脛骨及股骨的骨髓細胞，經過一系列的密度梯度離心及白細胞裂解而得到骨髓單核細胞。以RPMI-1640和1％的胎兒牛血清作為培養(yǎng)基，向裝有骨髓單核細胞的24孔細胞培養(yǎng)板(1x10<'7>cells/well)中加入β-葡聚糖(10uag/ml、100ug/ml)或不加入β-葡聚糖，分別在正常

2、氧分壓(95％O<,2>/5％CO<,2>)和低氧分壓(1％O<,2>/5％CO<,2>)下，37℃溫箱內孵育。孵育22個小時后，用不含血清的RPMI液進行2次培養(yǎng)基上清液的清洗以去除非貼壁細胞，而貼壁細胞在RPMI-1640和1％的胎兒牛血清作為培養(yǎng)液的條件下，在正常氧分壓的溫箱內繼續(xù)孵育48小時。用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)法檢測細胞培養(yǎng)上清液中的血管內皮生長因子(VEGF)的水平。以含有不同濃度上清的細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)人臍靜脈內皮

3、細胞，分析骨髓單核細胞培養(yǎng)上清對臍靜脈內皮細胞增殖的影響。從培養(yǎng)的骨髓單核細胞中提取RNA進行RT-PCR分析。 結果：ELISA結果顯示，正常氧分壓和低氧分壓時，無β-葡聚糖作用的骨髓單核細胞分泌的VEGF蛋白水平明顯低于低濃度β-葡聚糖組分泌的水平，兩者比較差異顯著；無β-葡聚糖作用的骨髓單核細胞在低氧分壓時分泌的VEGF蛋白水平明顯高于正常氧分壓時分泌的水平，兩者比較差異顯著；在本實驗所采用的β-葡聚糖濃度范圍內，隨著β-

4、葡聚糖濃度的升高，VEGF蛋白分泌水平并不增高。RT-PCR分析表明，低氧分壓時，低濃度β-葡聚糖組VEGF mRNA表達水平明顯高于無β-葡聚糖組。MTT結果顯示，低氧分壓時，隨著骨髓單核細胞培養(yǎng)上清液濃度的增高，低濃度β-葡聚糖作用的骨髓單核細胞上清液和高濃度β-葡聚糖作用的骨髓單核細胞上清液MTT比色光密度值都增高，且分別高于無β-葡聚糖組，兩者比較差異顯著。 結論：首次研究了β-葡聚糖對骨髓單核細胞分泌血管原性生長因子的