1、[目的]:研究血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）對(duì)肺單核細(xì)胞炎性相關(guān)細(xì)胞因子的調(diào)控作用以及調(diào)控機(jī)制；研究通過(guò)阻斷血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1（VEGF-R1）是否能夠改變肺炎性反應(yīng)（LIR）進(jìn)程，減輕急性肺損傷（ALI）。
　　[方法]：1.健康SD雄性大鼠3％戊巴比妥麻醉后提取肺泡灌洗液中單核細(xì)胞，細(xì)胞免疫熒光染色F4/80,激光共聚焦觀察單核細(xì)胞。同樣方法細(xì)胞培養(yǎng)2h后，按不同的處理方式將細(xì)胞隨機(jī)分為6組（每組n=10）：N組（none）

2、，LPS組（脂多糖LPS100ug/ml），0.05V組(VEGF0.05ng/ml），5V組(VEGF5ng/ml），LPS+0.05V組（LPS100ug/ml+VEGF0.05ng/ml），LPS+5V組（LPS100ug/ml+VEGF5ng/ml），處理24小時(shí)后，取上清液 ELISA測(cè)定 TNF-α；取細(xì)胞測(cè)定 IL-6/IL-8/TNF-α/IL-4/IL-10/VEGF-R1 mRNA表達(dá)；取細(xì)胞Western Blot

3、測(cè)定VEGF-R1的表達(dá)。同樣方法提取單核細(xì)胞，培養(yǎng)后將細(xì)胞隨機(jī)分為3組：N（none）組，LPS組（100ug/ml），TNF-a組（500ug/ml），細(xì)胞免疫熒光染色 VEGF-R1，激光共聚焦觀察VEGF-R1的表達(dá)以及確定單核細(xì)胞被激活。2.健康SPF級(jí)C57雄性小鼠3%戊巴比妥麻醉后提取肺泡灌洗液中單核細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)2h后，按不同的處理方式將細(xì)胞隨機(jī)分為6組（每組n=12）：N組（none），LPS組（LPS100ug/ml

4、），VEGF組（VEGF5ng/ml），Blockade組（VEGF-R1 Blocker8ug/ml），LPS+Blockade組（LPS100ug/ml+ VEGF-R1 Blocker8ug/ml），LPS+ Blockade+VEGF組（LPS100ug/ml+ VEGF-R1 Blocker8ug/ml+ VEGF5ng/ml），處理24小時(shí)后，取細(xì)胞測(cè)定IL-6/TNF-a/IL-4/IL-10 mRNA表達(dá)。
　　[

5、結(jié)果]:(1)大鼠肺單核細(xì)胞染色：確定了單核細(xì)胞的純化。（2）不同濃度VEGF刺激大鼠肺單核細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子mRNA的含量:LPS組與N組比較TNF-α，IL-6，IL-8，IL-10 mRNA的含量均顯著升高(P<0.001)； LPS+5V組的TNF-α mRNA含量明顯高于LPS組（P<0.05）；與LPS+0.05V組比較，LPS+5V組的TNF-αmRNA含量明顯升高(P<0.05)；與LPS組比較，LPS+5V組IL-1

6、0/TNF-α比率降低（P<0.05）；與LPS+0.05V組比較，LPS+5V組IL-10/TNF-α比率也降低（P<0.05）。與N組比較，其余各組IL-10/IL-6比率均降低（P<0.05）；與LPS組比較，LPS+5V組IL-10/IL-6比率降低（P<0.05）；與LPS+0.05V組比較，LPS+5V組IL-10/IL-6比率同樣也降低（P<0.05）。（3）不同濃度VEGF刺激大鼠肺泡灌洗液炎性細(xì)胞因子TNF-α的含量（

7、pg/ml）：與N組、0.05V組、5V組分別比較，LPS組的TNF-α含量（pg/ml）均顯著升高(P<0.05)。（4）不同刺激下肺單核細(xì)胞VEGF-R1的表達(dá)：大鼠肺單核細(xì)胞表面豐富表達(dá)VEGF-R1。當(dāng)LPS刺激時(shí)，肺單核細(xì)胞被激活，胞體呈梭形或橢圓形，胞膜不規(guī)則，邊緣有毛刺，毛刺呈放射狀緊緊貼壁，胞漿有空泡，胞核形態(tài)不一，LPS能夠?qū)е耉EGF-R1顯著上調(diào)。（5）大鼠肺單核細(xì)胞VEGF-R1蛋白的表達(dá)：LPS組和N組比較，V

8、EGF-R1的蛋白表達(dá)增加，VEGF-R1光密度/GAPDH升高（P<0.05）。（6）大鼠肺單核細(xì)胞 VEGF-R1與 TNF-α表達(dá)的關(guān)系：VEGF-R1與TNF-α呈正相關(guān)，而VEGF-R1與IL-4呈負(fù)相關(guān)，VEGF-R1與IL-10也呈負(fù)相關(guān)。（7）阻斷VEGF-R1后小鼠肺單核細(xì)胞分泌炎性細(xì)胞因子mRNA的含量：與N組比較，LPS組TNF-αmRNA的表達(dá)明顯升高（P<0.05）；LPS+Block組TNF-αmRNA的表達(dá)

9、與LPS組比較，明顯降低（P<0.05）；LPS+Block+V組與LPS+Block組比較，TNF-αmRNA的表達(dá)又進(jìn)一步升高（P<0.001）；LPS組與N組比較IL-6 mRNA的表達(dá)明顯升高（P<0.05）；LPS+Block+V組與LPS+Block組比較，IL-6 mRNA的表達(dá)又進(jìn)一步升高（P<0.05）。LPS組與N組比較，IL-10/TNF-α比率明顯降低（P<0.05）；LPS+Block組與LPS組比較，IL-1