1、【背景】
　　MicroRNA是近年發(fā)現的一類長約21-25個核苷酸片段的非編碼的小分子RNA，其通過與靶mRNA3‘非翻譯區(qū)結合，在轉錄后水平形成RNA誘導的基因沉默復合體影響mRNA的翻譯，從而發(fā)揮其生物學功能，影響生物體發(fā)育，細胞增殖、凋亡、分化等。其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展方面也有著重要的作用。胃癌作為世界上發(fā)病率第四、腫瘤相關性死亡率第二的疾病，像其它惡性腫瘤一樣，其發(fā)生、發(fā)展也受遺傳學和表觀遺傳學多級聯的復雜調控。雖然很多研

2、究證明microRNA與胃癌存在密切的相關性，但其在胃癌的功能及潛在的機制仍然不明。一些研究已經證實胃癌組織中存在很多microRNA分子的差異表達，并且發(fā)揮著促癌基因或抑癌基因的作用。我們參考國內外相關文獻關于胃癌microRNA表達譜的研究，初步預測microRNA-148a/b在胃癌中存在著差異表達，并發(fā)揮著特殊的生物學功能。本課題將對microRNA-148a/b在胃癌的表達水平及功能與作用機制進行初步的探討。
　　【目的

3、】
　　1、檢測microRNA-148a/b在胃癌組織中的表達水平。
　　2、研究microRNA-148a/b在胃癌中的功能。
　　3、構建microRNA-148a/b慢病毒表達載體。
　　4、探討microRNA-148a/b在胃癌發(fā)揮功能的可能機制。
　　【方法】
　　1、收集23例胃癌患者手術切除后的腫瘤組織及癌旁組織標本，提取組織中的總RNA，qPCR檢測microRNA-148a/b在

4、癌組織和癌旁組織中的相對表達量，使用相對定量法分析其表達差異。
　　2、運用microRNA-148a/b-mimics化學合成物，通過脂質體瞬時轉染的方法，轉染人胃癌MKN28，SGC7901細胞，使胃癌細胞內microRNA-148a/b水平升高，進行劃痕和transwell遷移實驗，測定其對胃癌細胞遷移能力的影響。
　　3、構建microRNA-148a/b慢病毒過表達載體，經測序鑒定正確后，進行病毒的包裝與滴度檢測。

5、并用構建好的microRNA-148a/b慢病毒表達載體感染人胃癌SGC7901細胞，qPCR鑒定microRNA-148a/b在感染細胞中的表達效果。
　　4、運用生物信息學分析軟件TargetScan、MiRanda預測microRNA-148a/b可能的靶基因，并對預測結果應用DAVID數據庫進行功能聚類分析，選擇與抑制細胞侵襲、遷移能力相關的抑癌相關基因。對其預測的靶基因編碼蛋白用Western-blot方法進行檢測其在m

6、icroRNA-148a/b上調胃癌細胞MKN28內的表達變化。
　　【結果】
　　1、MicroRNA-148a/b在胃癌組織中表達顯著低于相對應的癌旁組織。
　　2、劃痕實驗和transwell實驗提示，運用miR-148a/b-mimics通過脂質體瞬時轉染使胃癌細胞MKN28和SGC7901內miR-148a/b升高，腫瘤細胞遷移能力顯著減弱。
　　3、成功構建了microRNA-148a和microRN

7、A-148b的兩個慢病毒表達載體，經雙酶切電泳及測序鑒定正確。用構建好的慢病毒載體感染人胃癌SGC7901細胞，qPCR鑒定其表達效果，結果顯示能顯著上調microRNA-148a/b在細胞內的表達水平。
　　4、生物信息學預測顯示PrPc為microRNA-148a/b的可能靶基因之一，Western-bolt結果顯示，在microRNA-148a/b上調的胃癌細胞MKN28內，PrPc表達顯著降低。
　　【結論】