1、病毒性出血熱(Viral hemorrhagic fevers，VHFs)是一類由病毒引起的，臨床癥狀主要表現(xiàn)在發(fā)熱和出血的一類疾病。這類疾病通常伴有休克等癥狀，病死率高，危害嚴(yán)重。引起病毒性出血熱主要包括數(shù)十種病毒的五個不同病毒科:布尼亞病毒科、沙粒病毒科、絲狀病毒科、黃病毒科及彈狀病毒科。至今，在我國流行的病毒性出血熱主要有腎綜合征出血熱、新疆出血熱、登革出血熱及2010年在我國發(fā)現(xiàn)的一種新型布尼亞病毒——發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼

2、亞病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus，SFTSV)等。目前對病毒性出血熱的治療方法有限，除個別病毒外，大部分沒有有效的疫苗可進(jìn)行防治。多數(shù)感染者早期沒有明顯的臨床特征，類似于流感。因此建立快速、靈敏的實驗室檢測方法對于病毒性出血熱疾病的治療和控制具有重要的意義。
　　目前，實驗室主要是通過病毒分離、PCR、ELISA等方法對病毒性出血熱進(jìn)行診斷。病毒分離被認(rèn)為是

3、診斷病毒感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但其病毒分離實驗過程耗時較長，而其他的檢測方法因其無法同時進(jìn)行多重檢測，且需大量的臨床樣本和人力操作等缺陷。目前，本實驗室已初步建立病毒性出血熱多重?zé)晒舛縍T-PCR檢測方法和懸浮芯片技術(shù)診斷病毒性出血熱多重血清學(xué)方法。為實現(xiàn)病毒性出血熱核酸的多重檢測及解決臨床早期機體內(nèi)抗體的存在問題，本實驗的目的是建立基于液相芯片技術(shù)對病毒性出血熱核酸進(jìn)行多重檢測的方法。
　　液相芯片技術(shù)是20世紀(jì)70年代中期由美國Lu

4、minex公司開發(fā)的一種高通量檢測技術(shù)平臺，它可以實現(xiàn)在一個反應(yīng)體系中同時完成100種不同分析物的定性、定量檢測分析，具有快速、操作簡單、高通量、高靈敏度、高信噪比、節(jié)省標(biāo)本及時間等優(yōu)點。目前國內(nèi)外研究較多的是應(yīng)用于蛋白質(zhì)的檢測，如細(xì)胞因子的活動水平檢測、腫瘤標(biāo)記物、激素水平的檢測等。
　　發(fā)熱伴血小板減少綜合征布尼亞病毒是我國首先發(fā)現(xiàn)的具有重要公共衛(wèi)生意義的新型布尼亞病毒，能夠引起以發(fā)熱伴血小板和白細(xì)胞減少以及消化道癥狀為主要臨

5、床表現(xiàn)的病毒性疾病。作為一種新發(fā)現(xiàn)的全新病原體，SFTSV的復(fù)制、傳播與致病等方面的機制均需進(jìn)一步闡釋，不同的細(xì)胞嗜性有可能是導(dǎo)致宿主發(fā)病、多器官受損乃至死亡的重要原因之一，研究SFTSV對體外培養(yǎng)的不同種類細(xì)胞的嗜性及對宿主細(xì)胞的影響，對開展相關(guān)基礎(chǔ)研究，了解其致病機制及其防控具有重要作用。
　　本研究主要分為兩大部分:
　　第一部分:通過NCBI網(wǎng)站下載31種病毒性出血熱病毒的全基因序列，經(jīng)軟件分析，在各出血熱病毒基因保

6、守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，用軟件對引物和探針進(jìn)行初步分析。利用體外轉(zhuǎn)錄得到的RNA模板進(jìn)行多重PCR擴增后，與標(biāo)記探針的微球雜交，進(jìn)行液相芯片檢測。初步建立了基于液相芯片技術(shù)檢測病毒性出血熱核酸的方法，評價引物探針對檢測的特異性和靈敏度，利用部分臨床血清樣本對方法的實用性進(jìn)行初步評價。
　　第二部分:通過不同感染復(fù)數(shù)(multiplicity of infection)的SFTSV感染Vero等10種不同組織來源的細(xì)胞株，采用雙