1、這一博士學(xué)位課題由兩部分研究工作構(gòu)成。
　　第一部分甲胎蛋白陰性與甲胎蛋白陽(yáng)性肝細(xì)胞癌臨床病理特征及預(yù)后研究
　　目的:甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)對(duì)于肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)術(shù)后的預(yù)后價(jià)值尚存爭(zhēng)議，本論文研究肝細(xì)胞癌術(shù)前血清AFP水平的預(yù)后價(jià)值，同時(shí)分析不同AFP水平肝癌患者的臨床病理特征。
　　方法:應(yīng)用病例對(duì)照研究的方法，回顧性分析中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)

2、院腫瘤醫(yī)院251例接受手術(shù)治療的肝細(xì)胞癌患者的臨床病理資料，按術(shù)前血清AFP水平分組，以20ng/mL為截點(diǎn)值，分成AFP陰性組(0-20 ng/ml)和AFP陽(yáng)性組(＞20 ng/ml)，其中AFP陰性組142例，AFP陽(yáng)性組109例，比較兩組患者的臨床病理特征，采用Kaplan-Meier法計(jì)算生存率，以Log rank檢驗(yàn)進(jìn)行生存曲線比較，用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析影響術(shù)后肝癌患者預(yù)后的相關(guān)因素。
　　結(jié)果:與AFP陰性肝

3、癌比較，AFP陽(yáng)性組患者的血漿凝血酶原時(shí)間較長(zhǎng)、肝被膜受侵比例較高、組織分化較差、巴塞羅那臨床肝癌分期較晚(P＜0.05)。女性肝癌患者術(shù)前AFP水平高于男性患者(P=0.04)。AFP陰性組患者1、3、5年無(wú)復(fù)發(fā)生存率為78.1％、57.5％和40.6％，高于AFP陽(yáng)性組患者1、3、5年無(wú)復(fù)發(fā)生存率61.8％、37.7％和31.4％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Log rank檢驗(yàn)，P=0.004）。AFP陰性組患者1、3、5年生存率為94.

4、4％、83.8％和62.3％，高于AFP陽(yáng)性組患者1、3、5年生存率87.2％、60.0％和36.7％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log rank檢驗(yàn)，P＜0.001)。Cox多因素分析結(jié)果顯示，AFP、腫瘤直徑和Edmondson-Steiner分級(jí)是影響肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素(P＜0.05)，與AFP陰性肝癌相比，AFP陽(yáng)性肝癌術(shù)后死亡風(fēng)險(xiǎn)增加了76.7％(OR=1.767，95％CI=1.108-2.816，P=0.017)。
　

5、　結(jié)論:AFP陽(yáng)性組肝癌惡性程度高于AFP陰性組肝癌。女性肝癌患者術(shù)前AFP水平高于男性患者。術(shù)前血清AFP水平是判斷肝癌術(shù)后預(yù)后的重要因素。
　　第二部分甲胎蛋白陰性與甲胎蛋白陽(yáng)性肝細(xì)胞癌基因表達(dá)譜差異研究
　　目的:肝細(xì)胞癌是具有不同臨床表現(xiàn)和分子生物學(xué)特征的異質(zhì)性疾病。本研究通過(guò)分析比較AFP陰性和AFP陽(yáng)性肝癌的mRNA表達(dá)譜差異，結(jié)合臨床資料，發(fā)現(xiàn)一組可能具有肝癌診斷和預(yù)后判斷價(jià)值的分子標(biāo)志。
　　方法:采用

6、安捷倫4×44k基因芯片平臺(tái)，檢測(cè)合并乙肝病毒(hepatitis B virus，HBV)感染的20例AFP陰性和20例AFP陽(yáng)性肝癌組織的mRNA表達(dá)譜，通過(guò)生物信息學(xué)分析，獲得差異表達(dá)基因。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(real time Quantiative PCR，real timePCR)和/或酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法驗(yàn)證部分差異表達(dá)基因。
　　結(jié)果

7、:通過(guò)表達(dá)譜芯片分析，在AFP陰性和AFP陽(yáng)性肝癌組織中發(fā)現(xiàn)352個(gè)差異表達(dá)基因。主成分分析顯示，AFP陰性肝癌組織高表達(dá)基因62個(gè)，主要參與細(xì)胞凋亡和程序性死亡等過(guò)程，AFP陽(yáng)性肝癌高表達(dá)基因290個(gè)，主要參與有絲分裂和細(xì)胞周期等過(guò)程。real time PCR檢測(cè)IFNGR1（interferon gamma receptor1，干擾素γ受體1）、LAMB3(lamininβ3，層連蛋白β3)、MFSD2A(major facili

8、tator superfamilydomain containing2A，促進(jìn)調(diào)解蛋白超家族2A)、RASD1(dexamethasone-inducedRAS related protein1，類(lèi)固醇誘導(dǎo)的RAS相關(guān)蛋白1)、STARD5(StAR-related lipidtransfer domain containing5，StAR關(guān)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5)和TRIM35(tripartite motifcontaining prote

9、in35，三結(jié)構(gòu)域蛋白35)等在AFP陰性肝癌組織高表達(dá)的6個(gè)基因，結(jié)果顯示LAMB3、MFSD2A、STARD5和TRIM35在AFP陰性肝癌組織中的表達(dá)高于AFP陽(yáng)性肝癌組織。肝癌患者血漿MFSD2A濃度顯著高于健康人，對(duì)于肝癌具有良好的診斷效能，ROC曲線的AUC值為0.8353(95％CI:0.7486-0.9220)，敏感性為74.16％，特異度為89.47％。并且，對(duì)于AFP陰性肝癌同樣具有良好的診斷效能，AUC值為0.83