1、傳統(tǒng)中藥地黃具有補腎、益氣、養(yǎng)血功能，地黃低聚糖(RGOs)是從地黃中提取的低分子量多糖成分，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其具有促進骨髓造血干細胞增殖，調(diào)節(jié)免疫、保護心肌等作用。中醫(yī)臟腑學說認為“腎”是儲藏“先天之精的”器官，腎虛是心衰的主要發(fā)病機制。現(xiàn)代中醫(yī)理論認為干細胞的產(chǎn)生、增殖及功能均與“先天之精”有密切關(guān)系，因此，地黃低聚糖可能影響來源于骨髓的間充質(zhì)干細胞(MSCs)的生物學特性，聯(lián)合MSCs移植治療心衰可能產(chǎn)生有益作用。 目的：

2、 觀察骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療心力衰竭時RGOs的治療作用，并在離體細胞培養(yǎng)水平探索這種治療作用的產(chǎn)生機制。 方法： 第一部分：分離成年大鼠MSCs，給予不同濃度RGOs干預(yù)，用MTT方法檢測其對MSCs增殖的影響；取第8代MSCs進行分組誘導：RGOs組、5-氮胞苷(5-Aza)組、RGOs加5-Aza組，并設(shè)空白對照組，采用干化學法、免疫熒光法和Western-blot法等分別檢測誘導后MSCs內(nèi)CK-MB、

3、cTnI、CX43等心肌特異性物質(zhì)的表達和ERK1/2蛋白的表達及活化情況，流式細胞儀檢測MSCs向心肌樣細胞的轉(zhuǎn)化率，觀察RGOs對MSCs向心肌樣細胞分化的作用及機制。 第二部分：選用50只Wistar大鼠，取4只作為細胞供體處死以取得骨髓間充質(zhì)干細胞進行培養(yǎng)備移植用，取6只作為正常對照組，剩余40只制備心力衰竭模型，給予腹腔注射阿霉素(總劑量15mg/kg)。末次注射后，觀察4周，對存活的36只心衰模型大鼠，隨機分為心衰模

4、型組、MSCs移植組、RGOs聯(lián)合MSCs移植組、RGOs組。通過重復(fù)尾靜脈注射的方式進行同種異體MSCs移植，移植前MSCs用DAPI進行標記，移植后RGOs聯(lián)合MSCs移植組和RGOs組給予RGOs粗提物200mg/kg/d灌胃。4周后行超聲心動圖檢測心臟功能；心臟標本切片于熒光顯微鏡下觀察移植細胞是否歸巢到心臟；Ⅷ因子免疫組化染色計算心肌組織毛細血管密度；左室心肌組織行天狼猩紅染色，計算膠原容積分數(shù)(CVF)。 結(jié)果：

5、 第一部分：本研究觀察到，RGOs可明顯促進離體培養(yǎng)的MSCs增殖，最佳濃度為100μg/ml。各誘導組均顯著表達CK-MB、cTnI、CX43，未誘導組陰性或僅有極微弱的表達，以RGOs聯(lián)合5-Aza組MSCs向心肌樣細胞的轉(zhuǎn)化率最高。RGOs組ERK1/2蛋白的活化形式表達最強。 第二部分：超聲心動圖結(jié)果顯示，與正常組相比，造模各組的射血分數(shù)(EF)、左室短軸縮短率(FS)均明顯下降(P＜0.05)，室壁運動減弱，室壁變

6、薄。與心衰組相比，各治療干預(yù)組的心臟收縮功能均有改善，表現(xiàn)為EF、FS升高，左室內(nèi)徑下降，毛細血管密度增加，左室CVF降低，以RGOs聯(lián)合MSCs移植組效果最明顯，但與單純MSCs移植組和RGOs組比較，除毛細血管密度達統(tǒng)計學差異(P＜0.05)外，心功能參數(shù)和CVF均未達統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。熒光顯微鏡下觀察，進行細胞移植的大鼠心肌切片上有DAPI標記的細胞，RGOs聯(lián)合MSCs移植組DAPI陽性細胞數(shù)目多于單純MSCs移植組。