1、目的：綠色熒光蛋白示蹤技術(shù)在大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞心臟移植中的應(yīng)用研究；攜帶HGF基因骨髓間充質(zhì)細(xì)胞移植治療大鼠心力衰竭的研究；G-CSF聯(lián)合攜帶HGF基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠心力衰竭的研究。 方法：從大鼠骨髓中分離骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后進(jìn)行培養(yǎng)和擴(kuò)增，用攜帶GFP的腺病毒感染MSC，植入心肌梗死后的大鼠心臟梗死邊緣區(qū)，觀察細(xì)胞移植后3天、7天、14天、21天、28天標(biāo)記細(xì)胞存活、遷移和分布情況；通過結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈的方法建立大鼠心

2、肌梗死模型。4周后根據(jù)心臟超聲檢查結(jié)果，將FS≤30％的大鼠隨機(jī)分為4組，觀察時(shí)程為4周：①對(duì)照組(n=6)：心梗邊緣注射生理鹽水；②MSC組(n=6)：心梗邊緣注射GFP-Ad感染的MSCs；⑨HGF組(n=6)：心梗邊緣注射HGF-Ad感染的MSCs：④HGF+CsA組(n=6)：心梗邊緣注射HGF-Ad感染的MSCs，并于細(xì)胞移植次日腹腔內(nèi)注射環(huán)孢A25mg/kg.d 14天。所有動(dòng)物腹腔注射BrdU標(biāo)記新生細(xì)胞。心肌梗死8周后，

3、行心臟超聲和血流動(dòng)力學(xué)檢查檢測心功能，將動(dòng)物處死取材。Western-Blot方法檢測HGF在心肌內(nèi)的表達(dá)。用HE染色，免疫熒光染色，TUNEL等方法評(píng)價(jià)各種干預(yù)對(duì)心臟形態(tài)，血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞增殖情況的影響，檢測心肌內(nèi)凋亡相關(guān)的蛋白表達(dá)，探討HGF的作用機(jī)制。 結(jié)果：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體內(nèi)、體外均可成功能表達(dá)GFP。攜帶GFP的腺病毒感染MSC的感染效率達(dá)到98％，并且基本沒有毒性作用。激光共聚焦顯微鏡可觀察到GFP可成功示蹤移

4、植的MSCs 28天；攜帶HGF的骨髓間充質(zhì)細(xì)胞可以在體內(nèi)成功表達(dá)HGF蛋白。心肌梗死8周后，MSC組與對(duì)照組相比，LVEDP(9.76±0.54 vs 10.09±0.68kPa)、LVSP(15.98±0.81 vs 15.08±0.88 kPa)、dp/dtmax(362.15±14.00 vs347.34±19.16 kPa/s)和FS(23.83±2.37 vs 21.33±1.76％)幾項(xiàng)指標(biāo)差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)

5、；HGF組與MSC組相比，LVEDP(7.65±0.52 vs 9.76±0.54 kPa)、(19.76±0.73 vs. 15.98±0.81 kPa)、dp/dtmax(503.48±16.97 vs. 362.15±14.00 kPa/s)和FS(29.63±2.88 vs. 23.83±2.37％)幾項(xiàng)指標(biāo)差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。HGF組的LVEDP顯著降低、Lvs.P和dp/dtmax升高和FS顯著增加。