1、目的:胰島新生相關(guān)蛋白(islet neogensis associat protein,INGAP)是一種與胰島再生有關(guān)的蛋白質(zhì),可以促進(jìn)胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞向胰島的轉(zhuǎn)化,從而使胰島再生.該實(shí)驗(yàn)研究旨在探討INGAP在畢赤酵母和大腸桿菌中表達(dá),來獲得可以具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的INGAP,為進(jìn)一步驗(yàn)證它在糖尿病動(dòng)物模型以及臨床實(shí)驗(yàn)及臨床應(yīng)用打下基礎(chǔ).方法:首先將INGAP基因,插入到含有AOX1啟動(dòng)子和α-factor信號(hào)肽序列的表達(dá)載體pPI

2、C9K中.采用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)對(duì)其進(jìn)行的高效的分泌表達(dá),采用G41 8篩選轉(zhuǎn)化子,甲醇誘導(dǎo)酵母表達(dá)后,重組蛋白質(zhì)分泌表達(dá)到發(fā)酵液上清中,表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)上SP-Sepharose Fast Flow陽離子交換樹脂柱并平衡后進(jìn)行電梯度洗脫,收集目的峰后用G25純化后真空冷凍收集目的蛋白.同時(shí)在大腸桿菌進(jìn)行了表達(dá),將合成的基因插入到融合表達(dá)載體PGEX-4T-1中26KD的谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶基因的下游,并以融合蛋白的形式在大腸桿菌BL21中表達(dá)