1、β-半乳糖苷酶(β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，β-D-galactoside galatohydrolase，EC 3.2.1.23)通常被稱為乳糖酶(Lactase)。該酶能將乳糖水解為半乳糖和葡萄糖，并具有半乳糖苷的轉(zhuǎn)移作用。目前，我國許多成年人和兒童是乳糖缺乏癥患者，他們體內(nèi)缺乏乳糖酶或乳糖酶活性很低。隨著社會的向前發(fā)展，牛奶逐漸成為人們的主要食品之一，但牛奶中乳糖含量較高，這將制約牛奶的食用量，因此，利用乳糖酶生產(chǎn)低乳糖乳及乳制

2、品是解決乳糖不耐受癥問題的最佳途徑，具有重要的實(shí)踐價(jià)值和理論意義。 本論文從新疆火焰山土壤中篩選出兩株具有胞外乳糖酶活性的菌株，利用分子生物學(xué)方法分別對兩株菌株進(jìn)行鑒定，同時克隆了Huob的乳糖酶基因，并在大腸桿菌BL21中進(jìn)行了表達(dá)。 研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 1．產(chǎn)乳糖酶菌株的篩選從新疆火焰山土壤中篩選出的兩株菌株分別為Huoa、Huob，并且確立了酶活力測定方法和標(biāo)準(zhǔn)曲線，繪制了在搖床水中菌株Huoa和菌株Hu

3、ob的酶活生長過程曲線。確定了原始菌株Huoa酶活性最高為0.074 U/mL，菌株Huob酶活性最高達(dá)到為0.415 U/mL。并且通過結(jié)晶紫染色后利用光學(xué)顯微鏡觀察了兩種菌的形態(tài)。 2．產(chǎn)乳糖酶菌株的分子生物鑒定通過細(xì)菌16srDNA通用引物對兩株菌體進(jìn)行PCR擴(kuò)增其對應(yīng)序列，然后對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，在GenBank中對比分析了菌株Huoa和菌株Huob同源性較高的菌株，分析鑒定其對應(yīng)兩種細(xì)菌的種屬。利用Dnaman軟件對

4、兩種菌的16srDNA進(jìn)行進(jìn)化樹分析，可知菌株Huoa的16srDNA與Cellulomonas Variformis的16S的相似性很高可達(dá)到96％，在進(jìn)化上很可能同屬于一個祖先。菌株Huob的16srDNA與Bacillus megaterium的16S親緣關(guān)系最近可達(dá)到100％，在進(jìn)化上很可能同屬于一個祖先。 3．乳糖酶基因克隆及原核表達(dá)針對菌株Huob的16SrDNA同源性較高的乳糖酶基因設(shè)計(jì)引物，克隆其全長的β-半乳糖