1、肺癌發(fā)病率和死亡率呈快速上升趨勢，目前已成為臨床最常見的惡性腫瘤之一，列居各種癌癥死亡的首要原因。腫瘤細胞通過免疫逃逸使腫瘤免受宿主防御機制的殺傷，并不斷進展。研究發(fā)現，協同刺激分子PD-L1(Programmeddeath-1ligand1，又命名為B7-H1)在包括肺癌的多種人腫瘤細胞系和實體腫瘤組織呈高表達并與腫瘤免疫逃逸相關。許多協同刺激分子如OX40、OX40L、CD40L和CTLA-4等除膜型外，還以可溶性的形式存在。臨床研

2、究顯示，有些可溶性協同刺激分子的表達水平具有診斷或疾病預后判斷的價值，患者腫瘤組織表達的PD-L1也可用于某些腫瘤臨床療效的參考指標。
　　 目前，因缺乏有效的檢測方法，國內外對可溶性PD-L1（sPD-L1）的研究報道尚不多見。健康人機體內是否存在sPD-L1因子，該可溶性因子在腫瘤患者尤其是肺癌患者體內表達水平是否出現異常及其生物學意義尚無深入研究，值得進一步探討。鑒此，本研究通過體外實驗研究發(fā)現肺癌細胞表面表達膜型PD-L

3、1并可以分泌可溶性PD-L1，兩者均可通過PD-1/PD-L1抑制途徑抑制T淋巴細胞增殖，發(fā)揮細胞免疫的負性調節(jié)作用；本研究中，我們應用蘇州大學醫(yī)學生物技術研究所自主研發(fā)的特異性人sPD-L1的ELISA體系對臨床肺癌患者開展深入研究，檢測臨床肺癌患者sPD-L1分子的表達特性，分析其各項臨床診斷指標的相關性，揭示該因子的表達水平與肺癌發(fā)生、發(fā)展的關系，探討sPD-L1是否可以作為肺癌患者臨床診斷、療效預測和預后判斷的依據，以PD-L1

4、為作用靶點，為肺癌的臨床治療提供一種新的免疫干預手段。
　　 一、可溶性PD-L1在肺癌環(huán)境下通過PD-1/PD-L1抑制途徑對T淋巴細胞功能的影響
　　 [目的]分析sPD-L1在肺癌細胞中的表達特性并探討其通過PD-1/PD-L1抑制途徑對人T淋巴細胞的生物學功能的影響。
　　 [方法]應用單克隆抗體標記和流式細胞術測肺癌細胞表面PD-L1分子和人外周血T細胞表面PD-1的表達特性，通過ELISA法檢測肺癌細

5、胞分泌的可溶sPD-L1的表達，應用CCK-8摻入法體外研究膜型和可溶性PD-L1對T細胞增殖的抑制作用。
　　 [結果]人外周血靜止性T細胞低表達或不表達PD-1分子，而活化T細胞表面則上調表達PD-1分子；細胞表面組成性表達PD-L1分子的肺癌細胞株均能產生sPD-L1；表達PD-L1的肺癌細胞能通過PD-1/PD-L1信號抑制T淋巴細胞的增殖和活化(P＜0.05)；其培養(yǎng)上清對T淋巴細胞的增殖具有一定的抑制效應(P＜0.0

6、5)；特異性阻斷該抑制信號在一定程度上可以恢復T淋巴細胞的增殖活性。
　　 [結論]肺癌細胞表面表達膜型PD-L1并可以分泌可溶性PD-L1，兩者均可抑制T淋巴細胞增殖，發(fā)揮細胞免疫的負性調節(jié)作用，這可能使腫瘤抗原特異性T淋巴細胞不能及時活化并清除腫瘤細胞，導致肺癌細胞產生免疫逃逸。
　　 二、肺癌患者外周血可溶性PD-L1表達水平及其臨床意義
　　 [目的]檢測肺癌患者血清中可溶性程序性死亡配體-1(sPD-L

7、1)的表達水平并探討其臨床意義。
　　 [方法]篩選2009年6月至2011年3月蘇州大學附屬第二醫(yī)院呼吸科肺癌患者，共入選患者81例，其中男55例，女26例，年齡34～87歲，平均（65±6）歲。所有肺癌患者均為初診且經組織或細胞病理學確診；以88例性別、年齡匹配的健康體檢者作為對照組，收集上述人群外周血清并記錄肺癌患者的臨床資料。采用Western-blot方法和酶聯免疫吸附方法(ELISA)檢測上述人員血清中sPD-L1的

8、表達特性；免疫熒光標記和流式細胞術檢測上述人群CD4+PD-1+T細胞、CD8+PD-1+T細胞及CD14+單核細胞PD-L1的變化。
　　 [結果]肺癌患者外周血存在sPD-L1分子的表達，其水平為(2.04±1.42)ng/ml，明顯高于健康人外周血中該因子的含量(1.04士0.67)ng/ml，(P＜0.001)；肺癌患者血清中sPD-L1的異常高表達和淋巴結轉移程度和有無遠處轉移密切相關。雙色熒光標記標檢測發(fā)現肺癌患者外

9、周血T細胞亞群中CD4+PD-1+、CD8+PD-1+百分率(P＜0.05)均增高，同時，檢測到單核細胞上PD-L1的表達水平也明顯增加(P＜0.05)。連續(xù)采樣檢測治療前后外周血CD4+T和CD8+T細胞上PD-1表達水平和CD14+單核細胞上PD-L1表達水平的動態(tài)變化，結果顯示，療效明顯患者CD4+T和CD8+T細胞上PD-1和單核細胞上PD-L1水平雖仍較健康者偏高，但較肺癌患者平均水平明顯減低，而療效不顯著甚至進展肺癌患者T淋

10、巴細胞表面PD-1表達則較平均水平進一步升高(P＜0.05)。
　　 [結論]肺癌患者外周血清中sPD-L1的表達異常增高，且與肺癌的分期、轉移和療效有關，在個體化治療中有助于肺癌患者的預后判斷，可能成為重要的抗腫瘤靶點及分子標志物；肺癌患者外周血T細胞和單核細胞上也存在PD-1和PD-L1的異常表達，提示PD-1/PD-L1信號在T細胞與單核細胞相互作用過程中可能抑制T細胞增殖，從而導致肺癌細胞逃脫T細胞殺傷，參與疾病的發(fā)生發(fā)

11、展。
　　 綜上所述，本課題研究獲得了以下研究結果：(1)組成性表達PD-L1分子的肺癌細胞株均能產生sPD-L1；在體外T細胞共培養(yǎng)體系中可以抑制T淋巴細胞的增殖，通過PD-L1阻斷型單抗可以部分恢復T細胞增殖的能力。提示肺癌細胞表面的PD-L1系通過和激活的T細胞膜表面的PD-1結合而產生負性免疫調控作用。(2)利用自主研發(fā)的sPD-L1ELISA試劑盒，發(fā)現肺癌患者血清中存在sPD-L1高表達，且這種高表達和肺癌的分期和淋