1、自1981年首先發(fā)現(xiàn)艾滋病以來，HIV病毒已造成了全球性的傳播，成為威脅人類健康的主要因素之一。普遍認為研究出安全有效的HIV疫苗是抵抗艾滋病的最佳途徑。目前，HIV疫苗的研制策略包括傳統(tǒng)的減毒、滅活疫苗，以及靠現(xiàn)代基因工程發(fā)展起來的亞單位疫苗、DNA疫苗和重組載體疫苗等，但仍沒有哪一種疫苗可有效預防HIV的感染。亞單位疫苗不含病毒核酸，具有良好的安全性，對它的研究一直受到人們的關注。以往的研究表明，基于單一基因而設計的亞單位疫苗免疫原

2、性有限，無法完全中合HIV病毒的感染。將多個基因融合表達，得到的重組抗原具有更多的抗原決定簇，有更好的免疫原性。桿狀病毒表達載體系統(tǒng)可以容載大片段外源基因，可使多個基因共表達，克服了由單一成分所構(gòu)成的亞單位疫苗免疫原性弱的缺點。而且，桿狀病毒表達載體系統(tǒng)具有翻譯后修飾功能，表達產(chǎn)物天然活性好，免疫原性高，因而在疫苗研究中更具有優(yōu)勢。 本實驗采用PCR方法從HIV-1基因組cDNA質(zhì)粒pNL4-3中克隆到除外膜蛋白基因env外的所

3、有基因片段(包括gag、vpr、pol、vpu，vif、tatl、tat2、nef,revl、rev2)，再用PCR重疊延伸剪接技術(SOEPCR)將單個基因片段相互連接，并突變rev，以外的全部基因的終止子，得到三個較大的融合片段，即gag-vpr、pol-vpu-vif-tat-nef，nef-rev。利用片段上的獨特酶切位點，將三片段依次插入pBacPAK8質(zhì)粒，得到重組轉(zhuǎn)移載體pBacPAK76-04。在重組轉(zhuǎn)移載體中，除env

4、外的所有HIV-1基因融合成為了一個單一的、大的開放閱讀框。將重組轉(zhuǎn)移載體pBacPAK76-04與線性化的Bm-BacPAK6DNA共轉(zhuǎn)染家蠶BmN細胞，經(jīng)同源重組，含有目的基因的開放閱讀框插入到多角體啟動子下游，從而獲得重組病毒Bm-BacPAK76-04。通過挑斑以篩選得到純化的重組病毒后，感染家蠶BmN細胞，分別收集24h、48h、72h、96h和120h的表達產(chǎn)物，用HIVP24抗體進行ELISA分析，結(jié)果表明重組蛋白在細胞中