1、上海第二醫(yī)科大學(xué)博士后學(xué)位論文利用重組腺病毒載體進(jìn)行腫瘤基因治療的研究姓名：韓力薇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士后專(zhuān)業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：陸陽(yáng)陳紅專(zhuān)20020601對(duì)正常細(xì)胞不產(chǎn)生影響。而且，因?yàn)樵谝话闱闆r下，只有肝癌組織的細(xì)胞能夠產(chǎn)生AFP，一旦肝癌完全治愈后，即使還有腺病毒存在，治療基因也不能表達(dá)，這樣同時(shí)解決了治療基因的表達(dá)調(diào)控問(wèn)題。H102D是上海三維生物技術(shù)有限公司構(gòu)建的重組溶瘤性腺病毒，它刪除了人v型腺病毒的E1B區(qū)和E3區(qū)，插入AFP啟

2、動(dòng)子為特異性啟動(dòng)子，同時(shí)插入TRAIL(王NF—RelatedApoptosisInducingLigand)基因。在AFP啟動(dòng)子的調(diào)控下，H102D通過(guò)以下兩方面機(jī)理來(lái)治療肝癌：(1)在AFP陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞中選擇性復(fù)制，產(chǎn)生溶瘤作用，殺死肝癌細(xì)胞；(2)在AFP陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞中表達(dá)TRAIL基因，誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。細(xì)胞感染H102D后的生長(zhǎng)曲線(xiàn)檢測(cè)結(jié)果顯示，高M(jìn)OI感染時(shí)，H102D能顯著抑制AFP陽(yáng)性肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)。以同樣的MO

3、I感染AFP陰性的WI一38細(xì)胞和張氏肝細(xì)胞，細(xì)胞生長(zhǎng)基本不受影響。說(shuō)明AFP能有效地調(diào)控基因治療腺病毒的復(fù)制和治療基因的表達(dá)，使H102D只在AFP陽(yáng)性的肝癌細(xì)胞中選擇性復(fù)制并表達(dá)TRAIL基因誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡。H103是上海三維生物技術(shù)有限公司在H10l的基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)的具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的基因治療用重組腺病毒產(chǎn)品，刪除了腺病毒的E1B區(qū)和E3區(qū)，插入CMV啟動(dòng)子和重組熱休克蛋白70(Hsp70)基因，可在腫瘤組織中復(fù)制，殺死腫瘤細(xì)胞，并

4、且能激活機(jī)體免疫，對(duì)遠(yuǎn)端的轉(zhuǎn)移腫瘤也有較好的療效。通過(guò)實(shí)驗(yàn)摸索，我們建立了對(duì)H103中的插入基因CMv—HSP的PCR檢測(cè)方案。經(jīng)鑒定，H103病毒DNA中含有正確大小的插入基因片段。為了在今后的前期實(shí)驗(yàn)和臨床試驗(yàn)中從組織樣品中檢測(cè)出低濃度的H103DNA，我們另外設(shè)計(jì)了一對(duì)針對(duì)CMV和部分HSP的引物：A43一l和HLW一1，它的產(chǎn)物大小只有1kb左右。利用這對(duì)引物，我們對(duì)CMV～HSP插入基因進(jìn)行了梯度PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示：采用Ta