1、目的：通過研究血流干預(yù)藥物止血敏的凝血和蚓激酶的活血作用以及健脾活血中藥“糖胃康”對(duì)糖尿病運(yùn)動(dòng)障礙大鼠胃黏膜和黏膜免疫相關(guān)的神經(jīng)、胃腸激素之間相互調(diào)節(jié)的影響，明確血流因素在糖尿病胃動(dòng)力障礙發(fā)病機(jī)制中的作用以及神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)在糖尿病胃動(dòng)力障礙發(fā)病中的作用，闡明健脾活血代表方“糖胃康”對(duì)糖尿病胃動(dòng)力障礙大鼠神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)的影響。以揭示糖尿病胃動(dòng)力障礙發(fā)病的內(nèi)在機(jī)制，并部分明確中藥“糖胃康”治療糖尿病胃動(dòng)力障礙的作用部位、環(huán)節(jié)及分子機(jī)

2、制，為中藥防治糖尿病胃動(dòng)力障礙開辟新方法和理論依據(jù)，為臨床治療糖尿病胃動(dòng)力障礙提供一個(gè)有效的中藥制劑。 材料方法：取SPF級(jí)131只SD雄性大鼠，體重160±20g，隨機(jī)分為兩組，其中正常組10只，造模組121只，所有動(dòng)物禁食12h后，于次日清晨空腹?fàn)顟B(tài)下測(cè)血糖，剔除血糖過高或偏離正常值較大的動(dòng)物，稱重，一次性腹腔注射0.1mol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液鏈脲佐菌素(STZ)給造模組，注射劑量60mg/kg，正常對(duì)照組大鼠單次腹

3、腔注射等容量的0.1mol/L(pH4.5)檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液，至造模后第7天起，所有實(shí)驗(yàn)大鼠檢測(cè)血糖值，以血糖≥16.7mmol/L為造模成功。 將造模成功的大鼠按計(jì)算機(jī)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為模型組、止血敏組(20只左右)、蚓激酶組(30只左右)和中藥(30只左右)組。造模成功后第3天起，中藥組大鼠予中藥，以1g/1ml的水煎劑灌胃；止血敏組大鼠予止血敏灌胃；蚓激酶組大鼠予蚓激酶腹腔注射；模型組和正常組大鼠予等量蒸餾水灌胃，以

4、上三組均每周組藥6次，周日不給藥。所給藥物劑量相當(dāng)于成人臨床常用劑量2倍。 每天觀察并記錄動(dòng)物一般狀態(tài)(包括飲食、排泄、分泌物、毛發(fā)、精神狀態(tài)、自主運(yùn)動(dòng)、眼白內(nèi)障等、死亡等的變化)。每三周稱體重一次，按新體重重新計(jì)算給三藥的給藥藥量。于造模成功的第17周和第30周空腹測(cè)血糖一次，然后做胃排空實(shí)驗(yàn)確定糖尿病胃輕癱大鼠模型成功建立。 第30周，從大鼠心臟采血，取血清測(cè)量胰島素、C肽，測(cè)定血脂四項(xiàng)和超過氧化物歧化酶(SOD)以

5、及丙二醛(MDA)，取血漿做血液流變學(xué)的檢測(cè)；處死大鼠取其胰島尾部進(jìn)行中性甲醛固定后包埋、切片做蘇木素—伊紅染色(HE染色)及特殊染色—醛品紅-橙黃G染色，觀察胰島破壞情況；用幽門螺桿菌試紙(Hp)對(duì)胃竇黏膜進(jìn)行檢測(cè)后，取胃竇分別進(jìn)行中性甲醛固定、包埋、切片，做HE染色進(jìn)行胃竇部黏膜、肌肉層、微血管病變和淋巴細(xì)胞的觀察，然后用甲苯胺藍(lán)染肥大細(xì)胞、Masson法觀察神經(jīng)纖維，用免疫組化法檢測(cè)胃竇黏膜凋亡基因Bcl-2、Fas、炎性腫瘤壞死

6、因子-α(TNF-α)和白細(xì)胞介素1(IL-1β)以及神經(jīng)遞質(zhì)5-羥色胺(5-HT)、一氧化氮合酶(nNOS)和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面CD34，TUNEL法原位雜交檢測(cè)胃黏膜細(xì)胞凋亡；4％多聚甲醛固定胃竇、包埋、切片做胃腸激素P物質(zhì)(SP)和血管活性肽(VIP)的免疫組化染色；戊二醛固定胃體組織，電鏡下觀察胃微血管及神經(jīng)纖維的超微結(jié)構(gòu)，同時(shí)取其胸腺和脾臟進(jìn)行體重檢測(cè)。 結(jié)果：1糖尿病大鼠胃動(dòng)力障礙模型建立及干預(yù)藥物影響的結(jié)果1.1體重

7、及胰腺胰島變化造模前各組體重?zé)o顯著性差異(P＞0.05)；造模后第3、6、9、12、15、18、21、24、27和30周時(shí)所有造模組(模型組、止血敏組、蚓激酶和中藥組)體重均明顯低于正常組(均有P＜0.01)，各造模組(模型組、止血敏組、蚓激酶和中藥組)之間體重均無顯著性差異(均有P＞0.05)。所有造模組胰腺胰島細(xì)胞均受到不同程度的損害，胰島細(xì)胞萎縮或排列紊亂，腺體腫脹，胰島β和a數(shù)量明顯減少，各藥物組之間相互比較均有明顯差異(P＜0

8、.05)。 1.2血糖及血清胰島素和C-肽的變化造模前各組大鼠血糖水平和體重?zé)o差異，造模7天后，正常組大鼠血糖均值為3.20mmol/L，造模組血糖≥16.7mmol/L的111只大鼠血糖在16.72-24.1mmol/L內(nèi)，平均19.0±1.65mmol/L，符合實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)率為91.74％。實(shí)驗(yàn)30周后，正常組大鼠血糖均值為2.90mmol/L、體重均值為523g、血清胰島素水平1176.75±204.71pmol/L、血清

9、C肽水平0.035±0.01pmol/L；模型組大鼠血糖均值為25.75mmol/L、體重均值為192g、血清胰島素水平392.08±125.91pmol/L、血清C肽水平0.070±0.024pmol/L；兩組大鼠相比，有顯著性差異(均有P＜0.05或P＜0.01)。 綜合上述各指標(biāo)的變化表明糖尿病大鼠模型成功建立。經(jīng)過胃排空試驗(yàn)的檢測(cè)顯示所有造模組大鼠胃排空率顯著低于正常組(P＜0.01)，說明胃輕癱模型已經(jīng)建立，藥物組之間

10、無明顯差異(P＞0.05)。 2血液流變學(xué)的變化及胃黏膜細(xì)胞凋亡的結(jié)果2.1血液流變學(xué)及血脂四項(xiàng)、SOD、MDA的檢測(cè)結(jié)果造模30周后，所有造模組(模型組、止血敏組、蚓激酶組和中藥組)血流變指標(biāo)均有異常，全血黏度和血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、還原黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)均較正常組明顯升高，血沉較正常組加快，紅細(xì)胞變形指數(shù)增大，纖維蛋白原增加。 實(shí)驗(yàn)30周后，正常組大鼠血清總膽固醇1.32±0.08mmol/L、血清甘油三酯0.60

11、±0.18mmol/L、血清高密度脂蛋白膽固醇0.51±0.11mmol/L、血清低密度脂蛋白膽固醇0.29±0.05mmol/L、血清超氧化物歧化酶活性392.22±11.48U/ml、血清丙二醛含量8.06±0.54mmol/ml；模型組大鼠血清總膽固醇5.88±0.33mmol/L、血清甘油三酯4.37±0.30mmol/L、血清高密度脂蛋白膽固醇0.10±0.05mmol/L、血清低密度脂蛋白膽固醇1.51±0.12mmol/L

12、、血清超氧化物歧化酶活性115.98±18.50U/ml、血清丙二醛含量17.23±1.03mmol/ml；止血敏組、蚓激酶組和中藥組的血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇、超氧化歧化酶、丙二醛分別為5.38±0.36mmol/L、4.14±0.21mmol/L、0.22±0.09mmol/L、1.56±0.07mmol/L、93.86±18.18U/ml、17.45±0.64mmol/ml；5.22±0.21

13、mmol/L、3.76±0.41mmol/L、0.25±0.13mmol/L、1.52±0.11mmol/L、126.50±10.00U/ml、12.46±0.72mmol/L；4.39±0.48mmol/L、3.66±0.29mmol/L、0.31±0.07mmol/L、1.26±0.22mmol/L、247.46±21.47U/ml、10.24±0.43mmol/ml。與正常組比較差異顯著(P＜0.01)，與模型組和止血敏組相比，蚓