丹參酮代謝途徑DXR基因的克隆、特性分析及功能初步驗證和DXSI基因啟動子的克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、丹參(Salvia miltiorrhira),是唇形科鼠尾草屬的多年生草本植物。作為一種傳統(tǒng)的中藥材,丹參在臨床上常被用來治療心絞痛,心肌梗塞等心血管疾病。丹參的活性成分可分為水溶性和脂溶性活性成分。大多數(shù)脂溶性的活性成分是丹參酮形式的二萜醌類化合物,包括丹參酮Ⅰ,丹參ⅡA,丹參酮Ⅱb,隱丹參酮以及其他相關(guān)成分。萜類是植物界中廣泛存在的一類次生代謝物質(zhì),也是目前最大的一類植物天然產(chǎn)物。所有天然萜類化合物(包括丹參酮)均來自于兩個通用5

2、碳前體異戊烯基焦磷酸(IPP)和二甲基烯丙基焦磷酸(DMAPP)。其生物合成途徑有兩條:甲羥戊酸(mevalonate,MVA)和1-去氧木糖-5-磷酸(1-deoxy-Dxylulose-5-phosphate,DXP)途徑。
   本研究以丹參為材料,采用RACE法克隆丹參酮代謝途徑(包含DXP途徑)中5-磷酸脫氧木酮糖還原異構(gòu)酶(DXR)基因(DXR,GenBank Accession No.FJ476255)。SmDXR

3、全長cDNA包含1425bp的開放閱讀框,編碼475個氨基酸。氨基酸多重序列比對結(jié)果顯示SmDXR與其他植物的DXR如薄荷(Mentha x piperita)金魚草(Antirrhinum majsu)等有比較高的相似性,分別達到98%和91%。進化樹表明,SmDXR與番茄(Lycopersicon esculentum)的DXR有著最近的親緣關(guān)系。組織表達分析表明SmDXR都能在根莖葉中表達:在葉中表達最高,其次是根和莖,暗示SmD

4、XR是一個組成型表達的基因,這和大多數(shù)報道的DXR基因一致。水楊酸(SA)誘導實驗表明:SmDXR能夠被SA誘導。甲基茉莉酸(MeJA)誘導實驗表明,SmDXR不被MeJA誘導。通過大腸桿菌(E.coli)顏色互補實驗表明:SmDXR編碼了一個有功能的蛋白,同時SmDXR能夠推動DXP代謝途徑的流動。
   此外,本研究還通過LA-PCR的方法克隆得到丹參酮代謝途徑中5-磷酸脫氧木酮糖合成酶I(DXSI)基因的5'UTR及啟動子

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