1、地方性氟中毒(endemicfluorosis)是一種常見的環(huán)境地球化學性地方病,該病主要侵犯骨骼(氟骨癥)、牙齒(氟斑牙),以往研究認為是由于長期生活在高氟環(huán)境中攝入過量的氟而導致。本課題組近年著重于研究陜西省氟斑牙流行病學的發(fā)生和機理,關注高氟區(qū)常住居民氟斑牙臨床表現(xiàn)、發(fā)病情況及其相關的基因背景,逐漸發(fā)現(xiàn)氟斑牙致病機制與氯通道基因相關?；谠谙嗤叻h(huán)境中的個體產(chǎn)生不同患病情況的基因背景存在差異,本研究在前期課題組的研究基礎之上,將

2、進一步分析氯通道基因與氟斑牙患病率的相關性,探索氯通道與氟斑牙發(fā)生的關系。
　　方法:
　　一:采集陜西健康人群血樣132例,提取基因組DNA;應用質譜基因多態(tài)性分型檢測技術(MassArray)對CLCN7基因的3個單核苷酸多態(tài)性位點(Singlenucleotidepolymorphisms,SNP)rs11645645、rs2235579、rs2745001進行基因分型;并將分型結果與人類單體型基因組數(shù)據(jù)庫(Hapma

3、p)中中國漢族人群(HanChineseinBeijing,CHB)、日本人群(JapaneseinTokyo,JPT)、歐洲人群(UtahresidentswithNorthernandWesternEuropeanancestryfromtheCEPHcollection,CEU)的基因分型進行比對。
　　二:針對高氟區(qū)陜西省安康市紫陽縣進行樣本采集工作,采集受檢對象外周血樣本,用磁珠法獲取基因組DNA。結合課題組前期氟斑牙流

4、行病學研究樣本,應用MassArray方法對高氟區(qū)樣本做CLCN7基因多態(tài)性位點分型,分析各SNP位點的基因分型在氟斑牙患病組和正常對照組之間的差異,并將分型結果與Hapmap中CHB、JPT、CEU的基因分型進行比較。
　　三:從受檢樣本中隨機抽取100份血樣(氟斑牙患者50份,正常對照50份),獲取這100份血樣的mRNA,針對CLCN7基因進行熒光實時定量PCR擴增,以研究目的基因在正常對照組和病例組之間表達量的差異。

5、>　　結果:
　　1.初期調查的132例健康人群所選位點的基因分型與中國人群分布一致(P>0.05),但與歐洲人群的分布存在顯著差異(P<0.05)。
　　2.本研究共納入1723份基本資料信息完整的樣本,其中氟斑牙患者889例,對照組834例;男性909例,女性814例,受檢人群年齡范圍從12到77歲,平均年齡為38歲。實驗樣本rs11645645、rs2235579、rs2745001基因分型在病例組和對照組之間無統(tǒng)計學

6、差異(P>0.05),樣本各位點基因分型與中國人群分布一致(P>0.05),但與歐洲人群的分布存在顯著差異(P<0.05)。
　　3.熒光實時定量PCR結果顯示:病例組CLCN7基因mRNA水平的相對表達量比對照組降低。
　　結論:
　　1.本實驗選取的陜西健康人群具有代表性,其CLCN7基因多態(tài)性位點基因分布與數(shù)據(jù)庫列舉的中國人群近似;rs11645645、rs2235579、rs2745001位點可作為亞洲人群CL

7、CN7的標志SNP位點。
　　2.依據(jù)本研究選取的rs11645645、rs2235579、rs2745001位點,尚不能認為CLCN7基因多態(tài)性與氟斑牙的發(fā)病存在顯著相關,其原因可能與選擇的多態(tài)性位點有關,rs11645645、rs2745001都是非功能性的SNP位點,rs2235579位點的變異可改變CLCN7基因的外顯子剪切增強子(Exonicsplicingenhancer,ESE)的數(shù)量和種類。對氟斑牙與CLCN7基因

8、多態(tài)性的相關研究還需要對后續(xù)功能性位點的進一步排查。
　　3.氟斑牙患者CLCN7基因在mRNA水平的相對表達量比正常對照組降低,表明氟與ClC-7之間的確存在一定的關聯(lián),一方面可能是氟離子直接對ClC-7產(chǎn)生影響,另一方面可能是氟離子通過某些表觀遺傳調控機制調節(jié)CLCN7基因的表達。
　　本研究主要針對陜西省高氟地區(qū)進行大樣本流行病學研究,結合有關氟離子與氯通道關系的研究,探究氟斑牙與CLCN7基因多態(tài)性之間的相關性,發(fā)現(xiàn)