1、研究背景：心肌梗死(心梗)是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)疾病，心室重構(gòu)是決定心?；颊咝墓δ芗捌漕A(yù)后的主要因素之一。心室重構(gòu)是心臟基質(zhì)成分合成和降解失衡的結(jié)果，可引起心肌纖維化和進(jìn)行性心室擴(kuò)張，最終導(dǎo)致心力衰竭。近年來(lái)，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMPs)在心梗后心室重構(gòu)中的作用日益引起人們關(guān)注。MMPs是一類(lèi)蛋白水解酶，能降解所有心臟基質(zhì)成分，生理?xiàng)l件下是維持心臟膠原纖維網(wǎng)穩(wěn)定的重要因素，心臟基質(zhì)降解是

2、心室重構(gòu)的主要因素之一。體內(nèi)MMPs受多種因素調(diào)節(jié)，例如炎癥因子增強(qiáng)其活性，金屬蛋白酶組織抑制因子(tissueinhibitorsofmetalloproteinases，TIMPs)抑制其酶活性。心梗后MMPs的調(diào)節(jié)平衡迅速被打破，大量MMPs合成和釋放，心臟基質(zhì)降解明顯增強(qiáng)，從而引發(fā)心室基質(zhì)重構(gòu)系列事件。MMPs成員眾多，各成員作用機(jī)制不一；且MMPs調(diào)節(jié)機(jī)制復(fù)雜，各成員的調(diào)節(jié)機(jī)制也常不同。盡管目前有關(guān)MMPs的各種研究繁多，但對(duì)

3、MMPs各個(gè)成員在心室重構(gòu)中發(fā)揮的獨(dú)特作用，及其相應(yīng)的調(diào)節(jié)機(jī)制仍不甚清楚。β受體阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(Angiotensinconvertingenzymeinhibitor，ACEI)血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(AngiotensinⅡblockade，ARB)在大規(guī)模臨床試驗(yàn)中證明能降低死亡率，延緩心室重構(gòu)和心力衰竭的發(fā)生，但它們對(duì)MMPs/TIMPs的影響也不清楚。 目的：為了明確心梗后心肌MMPs/TIMPs變化規(guī)

4、律及其與炎癥因子的關(guān)系，以及β受體阻滯劑、ACEI和ARB對(duì)它們的干預(yù)作用，我們擬建立大鼠心梗模型，然后采用超聲心動(dòng)圖和血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)技術(shù)觀察心室結(jié)構(gòu)和心功能變化，再采用免疫組化、酶譜法、Western-blotting、熒光定量PCR等方法，從基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)水平了解梗死后不同時(shí)間點(diǎn)的多種MMPs/TIMPs同工酶的變化、MMPs/TIMPs與炎癥因子的關(guān)系，并觀察β受體阻滯劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑和血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(Angi

5、otensinⅡblockade，ARB)對(duì)MMPs/TIMPs和心室重構(gòu)、心功能的影響。 方法：結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支，建立大鼠心梗模型，設(shè)1、3、7、14、42d五個(gè)時(shí)間點(diǎn)，設(shè)立假手術(shù)組。超聲心動(dòng)圖測(cè)定左室前壁厚度、左室后壁厚度、室壁增厚率、左室舒張末內(nèi)徑、射血分?jǐn)?shù)；多導(dǎo)生理儀測(cè)定BPs、BPd、MBP、HR、LVEDP、+dp/dtmax和-dp/dtmax，酶譜法測(cè)定梗死區(qū)MMP-2，MMP-9活性；免疫組織化學(xué)法測(cè)MM

6、P-2、MMP-9和TIMP-2的蛋白表達(dá)；Western-blotting測(cè)定TIMP-1、TIMP-2蛋白表達(dá)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TNF-a、IL-1β、MMP-2，-9，-13，-14、TIMP-1、TIMP-2mRNA變化。另將心梗大鼠分為卡維地洛、福辛普利、氯沙坦治療組，于心梗后第1d開(kāi)始給藥，分別給予卡維地洛(10mg/kg.d)、福辛普利(10mg/kg.d)、氯沙坦(15mg/kg.d)，給藥42d后測(cè)定上述指標(biāo)，與

7、心梗組比較上述MMPs/TIMPs與炎癥因子指標(biāo)的變化。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：所有統(tǒng)計(jì)分析均采用SPSS12.0軟件完成，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以x±s表示，組間均數(shù)比較均采用方差分析，MMPs、TIMPsmRNA與IL-1β、TNF-αmRNA及LVEDP的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論： 1.大鼠心梗后梗死區(qū)變薄、左心室擴(kuò)張、左室收縮和舒張功能進(jìn)行性下降。 2.心肌組織MMP-2

8、mRNA和酶活性在心梗14天達(dá)高峰，而MMP-9mRNA和酶活性在心梗3天達(dá)高峰。提示MMP-9主要在心梗早期參與心室重構(gòu)，而MMP-2在心梗中后期參與心室重構(gòu)。 3.MMP-2和MMP-9主要來(lái)源于心肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。 4.TIMP-1mRNA在心梗后第一天達(dá)高峰，維持至42天，而其蛋白表達(dá)只在第14天出現(xiàn)；TIMP-2mRNA在心梗后第7天達(dá)高峰，而其蛋白表達(dá)在第14天出現(xiàn)，維持到42天。表明TIMP-1

9、mRNA與MMP-9mRNA變化一致，而TIMP-2mRNA與MMP-2mRNA變化一致，這提示他們之間有相互調(diào)控關(guān)系。TIMP1，TIMP2的轉(zhuǎn)錄與蛋白表達(dá)具有分離現(xiàn)象，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究 5.心梗后心肌組織中IL-1β、TNF-a基因轉(zhuǎn)錄升高并且其心梗后第一天表達(dá)與MMP9和TIMP1mRNA的表達(dá)相關(guān)，提示IL-1β、TNF-a可能參與MMP9，TIMP1的調(diào)控和心室重構(gòu)。 6.卡維地洛、福辛普利、氯沙坦治療后，