1、錯(cuò)配修復(fù)(mismatch repair,MMR)是最重要的DNA修復(fù)途徑之一,為正常細(xì)胞生命活動(dòng)過(guò)程中維持基因組穩(wěn)定性所必需,該功能的減弱或喪失是導(dǎo)致惡性腫瘤發(fā)生的重要因?yàn)椤Ｒ虼?對(duì)各種細(xì)胞在不同生理和病理狀況下的DNAMMR功能活性進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析具有重要意義。目前DNA MMR.活性檢測(cè)技術(shù)主要是體外檢測(cè)法,均不能真實(shí)反映生物體內(nèi)的真實(shí)狀況。本實(shí)驗(yàn)室前期建立了一種基于GFP的活細(xì)胞DNA MMR活性檢測(cè)技術(shù)。本論文研究首先運(yùn)用該技術(shù)對(duì)

2、幾種DNA MMR+與MMR-代表性細(xì)胞株的MMR功能活性在活細(xì)胞上進(jìn)行了檢測(cè),確證了該技術(shù)用于分析活細(xì)胞DNAMMR活性的有效性。進(jìn)而運(yùn)用這種“基于GFP的活細(xì)胞DNA MMR活性檢測(cè)技術(shù)”對(duì)環(huán)境雌激素苯并[a]芘對(duì)乳腺癌細(xì)胞ZR75-1細(xì)胞MMR的功能活性影響進(jìn)行了研究,并從基因表達(dá)表達(dá)水平上探索了ZR75-1細(xì)胞MMR的功能活性受苯并[a]芘影響的因?yàn)?。初步揭示了苯并[a]芘可通過(guò)下調(diào)MMR相關(guān)基因的表達(dá)水平而降低ZR75-1細(xì)胞

3、的MMR功能活性；同時(shí)也顯示了“基于GFP的活細(xì)胞DNA MMR活性檢測(cè)技術(shù)”在環(huán)境毒理學(xué)研究中應(yīng)用的可行性。
　　 目的:進(jìn)一步優(yōu)化基于GFP的活細(xì)胞DNAMMR活性檢測(cè)分析模型并拓展其應(yīng)用。通過(guò)研究環(huán)境雌激素苯并[a]芘對(duì)乳腺癌細(xì)胞ZR75.1細(xì)胞MMR活性影響初步探索該技術(shù)在環(huán)境毒理學(xué)研究中應(yīng)用的可行性。
　　 研究?jī)?nèi)容:1)用基于“GFP的活細(xì)胞DNA MMR活性檢測(cè)技術(shù)”分析檢測(cè)幾株DNA MMR+與MMR-代

4、表性細(xì)胞的MMR的功能活性；2)用基于“GFP的活細(xì)胞DNA MMR活性檢測(cè)技術(shù)”分析檢測(cè)苯并[a]芘對(duì)乳腺癌細(xì)胞ZR75-1的MMR活性的影響；3)檢測(cè)苯并[a]芘對(duì)乳腺癌細(xì)胞MMR系統(tǒng)重要基因表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果:1)活細(xì)胞DNA MMR分析新模型高效精確的檢測(cè)兩組MMR活性正常組細(xì)胞和MMR活性缺失細(xì)胞。MMR活性正常細(xì)胞株HeLa與ZR75-1的錯(cuò)配修復(fù)活性顯著高于MMR活性缺失細(xì)胞株RKO與HCT116(P<0

5、.001)；2)MMR功能正常的乳腺癌細(xì)胞ZR75-1細(xì)胞在1μM、5μM、10μM苯并[a]芘暴毒120 h后,各組細(xì)胞的EGFP相對(duì)表達(dá)值顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；3)乳腺癌細(xì)胞ZR75-l在1μM、5μM、10μM B[a]P暴毒120 h,細(xì)胞內(nèi)MMR相關(guān)基因hPMS1、GTBP、hMSH2、hMLH1 mRNA的表達(dá)水平降低,在0.01μM、0.1μM B[a]P暴毒120 h,細(xì)胞內(nèi)MMR相關(guān)基因hPMS1、GTBP、

6、hMSH2、hMLH1 mRNA的表達(dá)水平升高,并且有隨著濃度的降低,mRNA表達(dá)水平有逐漸升高的趨勢(shì)。
　　 結(jié)論：當(dāng)ZR75-l細(xì)胞在低濃度B[a]P(低于0.1μM)處理時(shí),細(xì)胞可通過(guò)上調(diào)MMR系統(tǒng)重要基因的表達(dá)來(lái)保護(hù)細(xì)胞不受到損傷。但是高濃度的B[a]P(高于1μM)時(shí),即超過(guò)了細(xì)胞修復(fù)損傷的能力,細(xì)胞內(nèi)MMR重要基因表達(dá)被抑制,相應(yīng)的細(xì)胞錯(cuò)配修復(fù)能力下降,細(xì)胞修復(fù)損傷能力下降。這對(duì)揭示苯并[a]芘的毒理機(jī)制提供了新的視