1、化療和內(nèi)分泌治療是激素受體陽(yáng)性的乳腺癌患者內(nèi)科治療的兩個(gè)重要方面。理論上來(lái)說(shuō),雌激素能促進(jìn)受體陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞更多的進(jìn)入細(xì)胞周期的S期,而化療藥物則主要作用于癌細(xì)胞的S期,因此雌激素水平的高低勢(shì)必會(huì)影響化療藥物的作用。探討兩者的相互關(guān)系,將有利于制定合理的化療以及內(nèi)分泌治療方案與時(shí)機(jī)。為此,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了臨床和體外細(xì)胞學(xué)的研究,通過(guò)了解雌激素對(duì)化療藥物引起的腫瘤細(xì)胞凋亡作用產(chǎn)生的影響來(lái)進(jìn)一步的了解雌激素和化療藥物相互作用的關(guān)系。
　

2、　第一章雌激素水平和新輔助化療后乳腺癌組織標(biāo)本中凋亡相關(guān)因子Bcl-2及Caspase-3表達(dá)的關(guān)系
　　目的：研究不同年齡段雌激素受體陽(yáng)性的乳腺癌患者體內(nèi)雌激素濃度對(duì)新輔助化療后乳腺癌組織標(biāo)本中凋亡相關(guān)因子Bcl-2及Caspase-3表達(dá)的影響及相互關(guān)系。
　　方法：我院乳腺科2008年1月至2010年5月接受兩周期CAF方案術(shù)前化療的乳腺癌患者按年齡分為A,B,C三組(≤35歲,36-49歲和≥50歲),共36例患者,

3、檢測(cè)所有患者化療前后血清雌二醇和化療后乳腺癌標(biāo)本凋亡相關(guān)因子Caspase-3及Bcl-2的表達(dá),分析三組患者血清雌二醇水平的變化與caspase-3及Bcl-2表達(dá)的關(guān)系。
　　結(jié)果：三組中,通過(guò)兩周期化療后,血清中雌激素水平均出現(xiàn)不同程度的下降,而相對(duì)于A組和C組,B組中雌激素水平下降幅度更大,且三組中雌激素水平均存在差異;Caspase-3的表達(dá)在三組中無(wú)明顯差異(p＞0.05),但在B組中略高(66.67％對(duì)58.33％,

4、50.00％)。Bcl-2的表達(dá)B組明顯低于A組及C組(25.00％對(duì)66.67％,75.00％;p＜0.05)。
　　結(jié)論：三組患者在化療兩周期后雌激素水平存在差異;而B(niǎo)組患者有較低的Bcl-2表達(dá)陽(yáng)性率和略高的Caspase-3表達(dá)陽(yáng)性率,這可能與雌激素水平相關(guān)。但本實(shí)驗(yàn)也試圖進(jìn)行兩者相關(guān)性的分析,可能由于樣本量偏少以及雌激素的標(biāo)準(zhǔn)差較大,沒(méi)有得出兩者有相關(guān)性的結(jié)論。
　　第二章雌激素對(duì)阿霉素引起MCF-7凋亡作用的影響

5、的體外細(xì)胞研究
　　目的：雌激素在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)阿霉素引起的人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7凋亡和增殖的影響。
　　方法：用不含雌激素的胎牛血清培養(yǎng)MCF-7細(xì)胞48小時(shí)后分為3組。A組:加入5組不同濃度的雌激素及不含雌激素的對(duì)照組進(jìn)行培養(yǎng);B組:加入5組不同濃度的雌激素及不含雌激素的對(duì)照組進(jìn)行培養(yǎng)同時(shí)加入阿霉素;C組:加入5組不同濃度的雌激素及不含雌激素的對(duì)照組進(jìn)行培養(yǎng)同時(shí)加入阿霉素和雌激素拮抗劑他莫西芬。再采用Hoechst熒光染

6、色法,PI染色及AnnexinV-FITC流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析各組細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期比例;用分光光度法檢測(cè)各組凋亡相關(guān)基因Caspase-3產(chǎn)生的酶活性,用RT-PCR法檢測(cè)各組凋亡相關(guān)基因Bcl-2及Bax的表達(dá)。
　　結(jié)果：A組細(xì)胞隨著雌激素濃度的增高,細(xì)胞周期中S期的比例明細(xì)增高,Bcl-2基因表達(dá)也明顯增高而B(niǎo)ax的表達(dá)降低;B組細(xì)胞中當(dāng)雌激素濃度為10-9mmol/L時(shí),細(xì)胞的凋亡率明顯增高(p＜0.05),Bcl-2基因

7、表達(dá)仍隨雌激素濃度的增高而增高,而B(niǎo)ax的表達(dá)仍逐漸降低;C組細(xì)胞總體的凋亡率無(wú)明顯差異,細(xì)胞均大部分停留在G0/G1期,Bcl-2和Bax的表達(dá)也失去差異性。Capase-3的表達(dá)在這三組中均無(wú)明顯差異(p＞0.05)。
　　結(jié)論：10-9mmol/L濃度的雌激素可以增強(qiáng)阿霉素對(duì)MCF-7的殺傷作用,加入他莫西芬后完全阻斷雌激素受體使得這個(gè)差異性消失,過(guò)低濃度的雌激素由于不能使更多的細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期S期,導(dǎo)致阿霉素對(duì)MCF-7細(xì)

8、胞的凋亡效應(yīng)降低;而高濃度的雌激素抑制阿霉素對(duì)MCF-7細(xì)胞的凋亡作用可能與Bcl-2的表達(dá)增高Bax的表達(dá)降低有關(guān)。
　　第三章雌激素對(duì)阿霉素引起MCF-7凋亡作用的影響的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：雌激素在MCF-7乳腺癌細(xì)胞株裸鼠移植瘤模型中對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的MCF-7細(xì)胞凋亡抑制作用的影響。
　　方法：建立二十只裸鼠MCF-7乳腺癌細(xì)胞株移植瘤模型。然后分為四組。A組:吡柔比星1.5mg/kg尾靜脈注射,苯甲酸雌二醇繼

9、續(xù)10mg/kg/2day腹腔注射,B組:吡柔比星1.5mg/kg尾靜脈注射,苯甲酸雌二醇繼續(xù)5mg/kg/2day腹腔注射,C組:吡柔比星1.5mg/kg尾靜脈注射。D組:滅菌用水尾靜脈注射。然后,繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線,計(jì)算腫瘤的最終重量,用RT-PCR方法檢測(cè)Bcl-2表達(dá)水平。
　　結(jié)果：在腫瘤的生長(zhǎng)曲線中,給藥后第九天,增長(zhǎng)趨勢(shì)出現(xiàn)顯著差異;A,B,C三組與對(duì)照組即D組相比腫瘤的生長(zhǎng)逐漸減慢(p＜0.05);A,B兩組與C組相

10、比腫瘤生長(zhǎng)明顯減緩(p＜0.05);但是,A,B兩組相比沒(méi)有顯著性差異(p＞0.05)。在腫瘤的最終重量中;A,B,C三組與D組相比明顯降低(p＜0.05);A、B兩組與C組相比明顯降低(p＜0.05);但是,A,B兩組無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。在Bcl-2的表達(dá)中;A,B兩組Bcl-2基因相比D組表達(dá)明顯增加(p＜0.05),C組Bcl-2基因表達(dá)相比D組明顯降低(p＜0.05);但是,A,B兩組無(wú)顯著性差異(p＞0.05)。