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文檔簡介
1、[目的]：構(gòu)建Id1 miRNA真核表達(dá)載體，并成功轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株，篩選穩(wěn)定表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞株，觀察對乳腺癌細(xì)胞的對Id1、MMP9表達(dá)的影響。 [方法]： 利用Invitrogen公司網(wǎng)上BLOCK-iT miR RNAi設(shè)計(jì)工具，設(shè)計(jì)針對Id1基因(ID:3397)的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄版本mRNA(NM_002165.2和NM_181353.1)都有效的干擾序列。將干擾序列插入pcDNA6.2-GW/Em
2、GFP-miR表達(dá)載體，構(gòu)建Id1miRNA真核表達(dá)載體，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染到乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株，以殺稻瘟霉素篩選穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。經(jīng)RT-PCR方法鑒定其對Id1、MMP9表達(dá)的影響。 [結(jié)果]： 成功構(gòu)建Id1 miRNA真核表達(dá)載體，經(jīng)電泳及測序鑒定正確，轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞系。經(jīng)過2W殺稻瘟霉素篩選，獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞系。經(jīng)RT-PCR方法鑒定，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染Id1 miRNA真核表達(dá)
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