1、成人呼吸窘迫癥(Adult respiratory distress syndrome，ARDS)是急救醫(yī)學(xué)中發(fā)病率和死亡率都很高的一種并發(fā)癥。急性肺損傷(Acute lung injury，ALI)系A(chǔ)RDS病程的早期階段，是指機(jī)體遭受嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、休克等打擊后，出現(xiàn)以彌漫性肺泡毛細(xì)血管膜損傷導(dǎo)致肺水腫和肺不張為病理特征，臨床表現(xiàn)為呼吸窘迫，伴有頑固性低氧血癥、肺順應(yīng)性下降和擴(kuò)散性炎癥浸潤(rùn)，其病死率高達(dá)45％-50％。因此，防治本類

2、疾病在急危重領(lǐng)域具有非常重要的意義。 藥物干預(yù)在ALI防治中具有重要作用?？鼓憠A藥物已應(yīng)用于ALI治療多年，但因傳統(tǒng)抗膽堿藥物如山莨菪堿等的作用機(jī)制不甚明了和副作用大，限制了抗膽堿類藥物的臨床應(yīng)用。鹽酸戊乙奎醚(pneheydidine hydrochloride，PHCD)是中國(guó)原創(chuàng)的新型選擇性的抗膽堿藥物，該藥對(duì)M受體亞型有選擇性，主要選擇作用于亞型M1、M3受體，對(duì)M2受體無明顯作用或作用較弱，因此對(duì)心臟作用弱，對(duì)心率變異

3、性、心肌耗氧量均優(yōu)于山莨菪堿。近來研究表明，鹽酸戊乙奎醚能改善微循環(huán)、降低毛細(xì)血管壁的通透性、細(xì)胞保護(hù)和減少溶酶體釋放等作用，提示鹽酸戊乙奎醚可能對(duì)急性肺損傷具有治療作用，因此，本研究從整體和分子水平研究鹽酸戊乙奎醚對(duì)ALI的保護(hù)作用及其機(jī)制，旨在為鹽酸戊乙奎醚治療ALI提供理論依據(jù)。全文分四部分進(jìn)行研究： 第一部分鹽酸戊乙奎醚對(duì)內(nèi)毒素誘導(dǎo)ALI大鼠的保護(hù)作用鹽酸戊乙奎醚(ip 0.03mg/kg,0.10mg/kg,0.30m

4、g/kg)能顯著降低LPS誘導(dǎo)ALI大鼠肺含水量、肺濕/干重比值、肺通透性指數(shù)、BALF中的蛋白含量及動(dòng)脈血PaCO2值(p<0.05)，明顯提高ALI大鼠動(dòng)脈血PaO2值及PH值(p<0.05)，并顯著改善肺部炎癥病理改變，減輕ALI大鼠肺泡II型上皮細(xì)胞損傷。 提示：PHCD能減輕內(nèi)毒素誘導(dǎo)ALI的微血管屏障損傷和肺泡II型上皮細(xì)胞損傷，抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)ALI的肺部炎癥反應(yīng)和通透性增高，提高肺部氣體交換功能。 第二部分

5、鹽酸戊乙奎醚對(duì)內(nèi)毒素ALI中性拉細(xì)胞肺內(nèi)聚集與氧自由基損傷的抑制作用鹽酸戊乙奎醚(ip 0.03mg/kg,0.10 mg/kg,0.30mg/kg)顯著降低ALI大鼠BALF中PMN計(jì)數(shù)比例、肺組織髓過氧化物酶活性、丙二醛含量和血清乳酸脫氫酶活性(p<0.05)，顯著提高肺組織和血清中的超氧化物歧化酶活性(p<0.05)；采用TUNEL法檢測(cè)肺組織細(xì)胞凋亡的情況，PHCD明顯抑制肺組織細(xì)胞凋亡。 提示：PHCD通過抑制內(nèi)毒素A

6、LI中性粒細(xì)胞肺內(nèi)聚集與氧自由基損傷作用，減輕肺組織細(xì)胞凋亡，來改善ALI肺部炎癥反應(yīng)和換氣功能，緩解LPS誘導(dǎo)微血管屏障損傷和通透性增高。 第三部分鹽酸戊乙奎醚對(duì)內(nèi)毒素急性肺損傷大鼠中性粒細(xì)胞凋亡的影響采用流式細(xì)胞儀和EMSA法觀察PHCD(0.03、0.3mg/kg)對(duì)ALI大鼠外周血中PMN凋亡凋亡率的影響；采用Westemblot法和RT-PCR法觀察PHCD(0.03mg/kg,0.1 0mg/kg,0.30mg/kg

7、)對(duì)PMN Mcl/bax蛋白表達(dá)和Fas/FasLmRNA表達(dá)的影響。結(jié)果表明，與模型組PMN凋亡率(16.05％±0.93％)相比，PHCD0.3mg/mg能顯著促進(jìn)PMN的凋亡(6.05％±0.93％)。中、高劑量的PHCD促凋亡機(jī)制可能是通過顯著增加Fas/FasL mRNA表達(dá)，降低抗凋亡基因Mcl-1蛋白表達(dá)，增加促凋亡基因bax蛋白表達(dá)，降低Mcl-1/bax比值來促進(jìn)PMN的凋亡，因此，PHCD通過促進(jìn)PMN凋亡來調(diào)節(jié)機(jī)

8、體的抗炎和促炎反應(yīng)，以達(dá)到促炎與抗炎平衡，起到保護(hù)肺損傷的作用。 第四部分鹽酸戊乙奎醚對(duì)內(nèi)毒素ALI大鼠肺組織NF-KB活性和表達(dá)及炎性細(xì)胞因子和一氧化氮合酶(NOS)的影響采用EMSA法觀察PHCD對(duì)肺組織NF-r,B活性的影響；免疫組化法觀察PHCD對(duì)NF-kB p65mRAN在肺組織中的表達(dá)；RT-PCR法觀察PHCD對(duì)LPS引起的肺組織中TNF-α和IL-βmRNA表達(dá)的影響；ELISA法檢測(cè)PHCD對(duì)肺組織中TNF-α

9、和IL-β細(xì)胞因子水平的影響；采用RT-PCR法和Westemblot法觀察PHCD對(duì)肺組織NOS mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)的影響，同時(shí)檢測(cè)血漿和肺組織中NOS和NO的含量。 結(jié)果表明：鹽酸戊乙奎醚(ip 0.03mg/kg,0.10mg/kg,0.30mg/kg)三種劑量不僅能顯著抑制大鼠肺組織NF-kB活性和表達(dá)(p<0.05)，而且降低肺組織中TNF-α和IL-B的mRNA表達(dá)及蛋白含量(p<0.05)，同時(shí)顯著抑制肺組織中