1、研究背景:關(guān)節(jié)軟骨缺損修復一直是骨外科關(guān)節(jié)損傷領(lǐng)域的一大難題。曾經(jīng)有學者用骨膜、軟骨，或直接細胞移植修復，因其無法進行分裂、增生、合成基質(zhì)及形成軟骨，故常導致失敗，自體軟骨細胞來源有限，體外大量擴增后又易發(fā)生老化及去分化，難以形成成熟的軟骨組織，缺乏正常透明軟骨的力學性能及耐用性。自體軟骨細胞移植在修復病損的同時，又形成了另一個新的組織缺損，并且其體內(nèi)來源有限。異體組織移植發(fā)生免疫排斥反應。人工合成組織代用品在植入后易導致異物反應、繼發(fā)

2、感染而最終排除體外。最終，骨髓基質(zhì)干細胞的成軟骨細胞誘導被認為是利用組織工程學的方法解決關(guān)節(jié)軟骨缺損的一種切實可行的治療方法。不同的誘導方式可以分化為不同數(shù)量或質(zhì)量的軟骨細胞，其分子水平上的基因表達方式以及所形成的相應的蛋白質(zhì)會有所不同，其基因表達可以通過基因芯片檢測其差異性，對于差異性明顯的編碼基因所形成的表面標志物的進一步檢測，特別是關(guān)于細胞黏附分子的檢測，可利用流式細胞檢測。 目的:以形態(tài)學、原位雜交和RT-PCR等技術(shù)確

3、定的不同誘導劑或誘導劑組合誘導MSCs向成軟骨等方向分化的結(jié)果為條件，對不同誘導劑或誘導劑組合MSCs向軟骨細胞系分化過程中的細胞基質(zhì)黏附分子受體蛋白的基因表達譜進行測定，以來加任何誘導劑的MSCs傳代培養(yǎng)組作為對照，對各組基因表達進行差異分析、比較，并根據(jù)各組最終基因譜的不同來相應的、有目的利用流式細胞儀對不同誘導劑或誘導劑組合間MSCs向軟骨細胞系分化過程中軟骨細胞的表面標志進行單克隆抗體標記，探討誘導MSCs向成軟骨分化的最佳條件

4、及MSCs向成軟骨分化的分子機制及蛋白表達，以期發(fā)現(xiàn)可能參與調(diào)解誘導MSCs向成軟骨細胞分化的一些免疫學因素。 方法:為此，本論文針對性地設計了以下三部分內(nèi)容：①應用形態(tài)學、原位雜交和RT-PCR等技術(shù)檢測軟骨細胞的標志，以確定MSCs是否分化為軟骨細胞，同時驗證不同誘導劑或誘導劑組合誘導MSCs向成軟骨方向分化的效果。②利用基因芯片測定不同誘導劑或誘導劑組合MSCs向軟骨細胞系分化過程中細胞基質(zhì)黏附分子受體蛋白基因表達譜。③通

5、過流式細胞儀對不同誘導劑或誘導劑組合MSCs向軟骨細胞系分化過程中軟骨細胞表面標志進行標記，以確定在誘導MSCs向成軟骨方向分化過程中細胞基質(zhì)黏附分子受體蛋白基因表達與最后的軟骨細胞表面標志蛋白的形成是否一致。 結(jié)論:應用基因表達譜和流式細胞學的研究結(jié)果表明，大鼠MSCs成軟骨細胞過程中細胞基質(zhì)黏附分子受體蛋白的基因表達在TGF-β1和DEX聯(lián)合誘導組中有上調(diào)表達，并最終可以形成成熟軟骨細胞表面的標志蛋白。提示大鼠基質(zhì)干細胞向軟