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文檔簡介
1、RNA干涉(RNAi)技術在實驗室中是一種強大的實驗工具,它是利用具有同源性的雙鏈RNA(dsRNA)誘導特異性的目標基因沉默,迅速降低基因表達水平。siRNA在RNA沉默通道中起中心作用,是對特定信使RNA(mRNA)進行降解的指導要素。
本研究通過Nucleotide BLAST在線設計含有小發(fā)夾機構的2條I1PP2A、P53和CREB對應模板DNA序列,經(jīng)過褪火、磷酸化、連接處理后克隆至psuppress質粒,構建重
2、組質粒psuppress-siI1PP2A、psuppress-siP53、psuppress-siCREB。通過酶切和測序鑒定重組產(chǎn)物的正確性。然后使用lipofectAMINE 2000轉染試劑將上述構建好的質粒分別轉染HEK293細胞。培養(yǎng)一定時間之后提取蛋白,利用western blot檢測I1PP2A、P53和CREB蛋白水平的變化。結果顯示:經(jīng)酶切及測序鑒定,成功構建了psuppress-siI1、psuppress-siP
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